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《生物酶法制備膠原小分子肽及其初步分離研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在學術論文-天天文庫。
1、廣西大學碩士學位論文生物酶法制備膠原小分子肽及其初步分離研究姓名：瞿應良申請學位級別：碩士專業(yè)：化學工藝指導教師：劉漢靈20070601生物酶法制備膠原小分子肽及其初步分離研究摘要膠原肽是由膠原蛋白酶解得到的肽混合物，由于膠原肽有著優(yōu)良的加工特性、營養(yǎng)特性以及生物活性，在化妝品行業(yè)、食品行業(yè)等方面有著廣泛的應用前景，膠原蛋白酶解產(chǎn)物膠原肽作為功能因子應用在化妝品中，分子量是最重要的影響因素，必須控制在1．5kDa以下。以往膠原蛋白酶解制備膠原小分子肽存在：膠原蛋白酶解產(chǎn)物分子量分布較廣，酶解產(chǎn)物中大分子膠原肽含量高等問題，束縛了膠原肽在化妝品中的應用。本論文采用兩步復
2、合酶解法，對膠原蛋白進行了酶解，極大地提高了酶解效率，解決了膠原蛋白難酶解，酶解產(chǎn)物分子量分布不集中等問題。本研究以膠原蛋白為底物，從膠原蛋白結構入手；單因素實驗篩選木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶、堿性蛋白酶、中性蛋白酶和風味蛋白酶等作為水解復合酶；復合酶優(yōu)選實驗確定復合酶由木瓜蛋白酶和菠蘿蛋白酶組成。通過單因素和正交實驗，確定了最佳酶解條件：pH值為6．5、酶解時間為4h、溫度為40"C、底物濃度為12％、木瓜蛋白酶和菠蘿蛋白酶酶用量分別3000和2000U／g，酸溶性多肽得率和水解度分別為60％和5．26％。十二烷基硫酸鈉一聚丙酰胺凝膠電泳表明：膠原蛋白酶解產(chǎn)物中大分子多
3、肽主要集中在25．7～40．3kDa之間。為了制備膠原小分子肽，膠原蛋白酶解產(chǎn)物采用由堿性蛋白酶和中性蛋白酶組成的復合酶進行了膠原小分子肽酶解研究。通過單因素實驗確定了最佳酶解條件為：pU值為9．5，溫度為50。C，時間為3h，堿性蛋白酶酶和中性蛋白酶酶用量分別為7000和4000U／g，酶解產(chǎn)物SEC-HPLC分析表明：酶解產(chǎn)物平均分子量為386．3Da，滿足了膠原小分子肽應用在化妝品中對其分子量的要求。用活性碳對酶水解產(chǎn)物進行脫色處理，以酶解液脫色率和多肽損失率考察脫色效果，得出活性炭對酶水解產(chǎn)物脫色的適宜條件：活性炭用量為1．5％、酶解液pH為5．5、脫色溫度為
4、35℃、脫色時間為40rain，此時酶解產(chǎn)物脫色率為86．21％，多肽損失率為6．12％。酶解產(chǎn)物分別采用截留分子量8kDa、20kDa超濾膜進行了處理，截留物SDS．PAGE實驗表明：兩種膜片截留物分子量都為37．6和32．5kDa。結合酶解產(chǎn)物分子量分布情況確定了超濾膜截留分子量為20kDa，通過單因素實驗，確定了最佳超濾條件為：肽濃度39．1g／L，壓強0．5MPa，pH5．0，室溫超濾150rain，分子量小于20kDa的酶解產(chǎn)物透過率達96．1％，透過物SEC．HPLC分析表明：分子量小于2kDa酶解產(chǎn)物峰面積99．79％。關鍵詞：膠原蛋白復合酶水解多肽超濾
5、STUDYoNPRERATIoNoFSMALLCoLLAGENPEPTIDESBYBIO．ENZYMATICHYDROLYSISANDTHESMALLPEPTIDESoFSEPARATIoNAbstractCollagenpeptidesistheenzymatichydrolysateofcollagenandamixturepeptides，becauseofitsgoodfunctionalproperties，phydionlogicalactivitiesandextensiveutilizationprospectinthefieldofcosmetic&
6、food，themolecularweightofhydrolyzedcollagenismostimportantfactorsinproductingcollagenpeptidestouseasfunctionalmaterialsincosmetic．Inthepreviousstudies，therearesomeproblemsinthecollagenhydrolyze，Hydrolysate’molecularweightislargoandthecontentofbigmolecularweightishigh，SOcollagenpeptidesa
7、pplicationswasastrictedincosmetic．inthepaper,adoptedtwo-complexproteasestohydrolyzecollagen，SOheightenedtheefficiencyofhydrolyzationandsolveddifficulthydrolyze．Usingcollagen嬲thesubstmteandtherateofaciditydissolutionpolypeptidesasexamination’indexfromthestructureofcollagen；Papai
