探析海藻糖對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞玻璃化凍存過(guò)程影響的研究

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1、大連理工大學(xué)碩士學(xué)位論文海藻糖對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞玻璃化凍存過(guò)程影響的研究姓名：陸凱申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：化學(xué)工程指導(dǎo)教師：馬學(xué)虎20070601大連理】：大學(xué)碩十學(xué)位論文摘要為獲得來(lái)源方便的神經(jīng)干細(xì)胞，開(kāi)展有效的干細(xì)胞移植及建立于細(xì)胞庫(kù)，需長(zhǎng)期低溫保存神經(jīng)干細(xì)胞。本文研究了神經(jīng)干細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中海藻糖的影響和海藻糖的玻璃化能力，并進(jìn)行神經(jīng)干細(xì)胞的玻璃化凍存過(guò)程的研究。首先，對(duì)海藻糖在神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程的影響進(jìn)行了研究。在神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中分別加入Omol／L、0．3mol／L、0．15mol／L、0．075mol／L、0．05mol／L、0．025mol／L的海藻糖，通過(guò)CCK-8

2、試劑盒連續(xù)六天進(jìn)行測(cè)試，結(jié)果顯示在神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程加入海藻糖不會(huì)影響細(xì)胞的增值，同時(shí)保持了其干細(xì)胞的特征，并且可以誘導(dǎo)分化為神經(jīng)元、少突膠質(zhì)細(xì)胞、星型膠質(zhì)細(xì)胞，從而確保了海藻糖應(yīng)用于神經(jīng)干細(xì)胞玻璃化凍存的安全性。其次，通過(guò)低溫冷臺(tái)和差示掃描量熱實(shí)驗(yàn)，對(duì)海藻糖與蔗糖的玻璃化能力進(jìn)行了比較，主要考察了玻璃化轉(zhuǎn)變溫度和反玻璃化的情況。在低溫冷臺(tái)上在i00℃／min降溫速率下，60％海藻糖和60％蔗糖均能實(shí)現(xiàn)玻璃化，但在以相同升溫速率復(fù)溫的過(guò)程中都有反玻璃化現(xiàn)象，60％蔗糖比6096海藻糖反玻璃化嚴(yán)重。在1009C／min降溫速率下，海藻糖能夠?qū)崿F(xiàn)玻璃化的最低濃度是55％，而蔗糖能夠?qū)?/p>

3、現(xiàn)玻璃化的最低濃度是58％。采用差示熱量掃描技術(shù)測(cè)量樣品的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度，60％海藻糖、55％海藻糖、60％蔗糖和58％蔗糖溶液玻璃化轉(zhuǎn)變溫度分別為-29．7"C、一30．8℃、一39．4℃和一45．6℃。最后，將海藻糖與二甲基亞楓、乙二醇、乙酰胺組成聯(lián)合冷凍保護(hù)劑用于神經(jīng)干細(xì)胞的玻璃化凍存。通過(guò)在冷臺(tái)上動(dòng)態(tài)直觀地觀察，以及玻璃化凍存神經(jīng)干細(xì)胞復(fù)蘇率的比較，優(yōu)選出了適合神經(jīng)于細(xì)胞玻璃化凍存的冷凍保護(hù)劑組成為：20％(v／v)二甲基亞砜(嘶SO)+2096(v／v)乙二醇(EG)+1096(w／v)乙酰胺(Acetamide)+0．5(M)海藻糖(Trehalose)。將優(yōu)選出的冷

4、凍保護(hù)劑分別用于兩種神經(jīng)干細(xì)胞的玻璃化凍存，一種是培養(yǎng)過(guò)程沒(méi)有加入海藻糖，另外一種是培養(yǎng)過(guò)程加入0．05mol／L的海藻糖，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示神經(jīng)干細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程加入海藻糖對(duì)細(xì)胞玻璃化凍存后的復(fù)蘇率有明顯的提高，同時(shí)本文的實(shí)驗(yàn)結(jié)果與文獻(xiàn)中報(bào)道過(guò)的20％(v／v)DMSO+2096(v／v)EG+10％(w／v)Acetamide+O．3(mol／L)Sucrose玻璃化凍存神經(jīng)干細(xì)胞的復(fù)蘇率也進(jìn)行了比較，結(jié)果表明，在神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程加入0．05mol／L的海藻糖，用本文優(yōu)選出的保護(hù)劑玻璃化凍存后的復(fù)蘇率為71．7％。關(guān)鍵詞：神經(jīng)干細(xì)胞；海藻糖；保護(hù)劑；玻璃化海藻糖對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞玻璃化凍

5、存過(guò)程影響的研究InfluenceofTrehaloseontheVitrificationCryopreservationofNeuralStemCellsAbstractItisnecessarytoachievethelong-tarmcryopreservationofNeuralstemcells(NSCs)foritsoffshelfavailability．Thispapermainlyinvestigatetheinfluenceoftrehalosetothesterncellcultureprocessanditsvitrificationability，an

6、dthenthevitrificationcryopreservationofNSCswaspreliminarilyconductedbyaddingthetrehaloseinCPA．Firstly，theinfluenceoftrehalosetothestemcellcultureprocesshasbeeninvestigated．AddingtrehalosewithconcentrationofOmoI／L、0．3mol／L、0．15mol／L、0．075mol／L、0．05mol／L、O．025mol／LresepectivelyduringtheNSCscult

7、ureprocess．a(chǎn)ndbeingtestedcontinuouslybycck-8agentkitsforsixdays，itwasfoundthattheadditionoftrehaloseduringtheNSCscultureprocesscouldnotaffecttheproliferationofcell，butkeptthecharacteristicofthestemcell，differentiatingintoneurons,oligodendroey