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《經(jīng)鼻腔移植缺氧預(yù)處理的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)于小鼠腦出血作用的研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、導(dǎo)師單位：首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京友誼醫(yī)院完成日期：二○一五年五月首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的論文是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的研究成果。除了文中特別加以標(biāo)注引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)的成果作品。對(duì)本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識(shí)到本聲明的法律后果由本人承擔(dān)。作者簽名：日期：年月日導(dǎo)師簽名：日期：年月日首都醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文目錄中文摘要……………………………………………………………………2英文摘要…
2、…………………………………………………………………4前言（引言、序言）………………………………………………………7正文（包括材料、方法、結(jié)果、討論、結(jié)論等部分）第一部分：腦出血模型的建立……………………………………………7第二部分：缺氧預(yù)處理骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞………………………………17第三部分：經(jīng)鼻腔移植缺氧預(yù)處理骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞…………………29第四部分：經(jīng)鼻腔移植缺氧預(yù)處理骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)于小鼠腦出血神經(jīng)功能作用的影響及機(jī)制的研究……………………41結(jié)論…………………………………………………………
3、………………51文獻(xiàn)綜述……………………………………………………………………58參考文獻(xiàn)……………………………………………………………………63附錄…………………………………………………………………………71攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況………………………………………………72致謝…………………………………………………………………………73個(gè)人簡(jiǎn)歷……………………………………………………………………741首都醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文中文摘要研究背景腦出血占全部腦卒中的10%-15%，具有很高的死亡率及致殘率，對(duì)患
4、者、家庭及社會(huì)均可造成極大的負(fù)面影響和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。目前，尚沒(méi)有美國(guó)FDA批準(zhǔn)的用于治療腦出血的有效藥物。近年來(lái)，干細(xì)胞移植已經(jīng)成為治療多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病的臨床研究熱點(diǎn)，用于腦出血的治療亦逐漸受到研究者的關(guān)注。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（Bonemarrowmesenchymalstemcells，BMSCs）是目前研究最多的一種干細(xì)胞。BMSCs具有向三個(gè)胚層分化的潛能，可自體取材移植，不需要組織配型、無(wú)免疫排斥等諸多問(wèn)題，同時(shí)因其致癌性較低、來(lái)源豐富、培養(yǎng)條件相對(duì)簡(jiǎn)單等優(yōu)勢(shì)而成為研究熱點(diǎn)。但是，對(duì)于治療不同的疾病，
5、如何選擇適宜的BMSCs移植途徑、劑量和時(shí)間，以及治療的遠(yuǎn)期效果等問(wèn)題還在不斷的研究探索中。研究目的通過(guò)在體和離體實(shí)驗(yàn)，探討經(jīng)鼻腔途徑移植缺氧預(yù)處理的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)小鼠腦出血的治療作用及相關(guān)機(jī)制。實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)共分為4個(gè)部分。1．建立小鼠腦出血模型：用不同劑量的膠原酶IV立體定向注射至小鼠腦基底節(jié)區(qū)，采用病理解剖及行為學(xué)方法檢測(cè)腦出血模型成功與否。2．缺氧預(yù)處理BMSCs：取原代培養(yǎng)BMSCs，置入氧氣濃度為0.5%的容器中24小時(shí)，應(yīng)用MTT法檢測(cè)缺氧預(yù)處理后的細(xì)胞活性，劃痕試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的遷移能力，
6、Westernblot技術(shù)檢測(cè)相關(guān)血管及神經(jīng)生長(zhǎng)因子的表達(dá)。3．檢測(cè)經(jīng)鼻腔途徑移植的HP-BMSCs：經(jīng)鼻腔途徑給予HP-BMSCs，熒光顯微鏡下沿嗅球、大腦皮層、血腫周?chē)鷮ふ覠晒鈽?biāo)記的HP-BMSCs，驗(yàn)證該方法的可靠性。4．應(yīng)用神經(jīng)行為學(xué)、免疫組化及免疫印記等技術(shù)驗(yàn)證HP-BMSCs移植治療效果：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為假手術(shù)組，對(duì)照組及治療組。全部實(shí)驗(yàn)小鼠在建模前均進(jìn)行行為學(xué)訓(xùn)練。（1）神經(jīng)行為學(xué)檢測(cè)方法包括mNss、Rotarod、貼紙去除實(shí)驗(yàn)以及曠場(chǎng)試驗(yàn)，分別檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)經(jīng)鼻腔移植HP-BMSCs對(duì)
7、于小鼠行為學(xué)的變化；（2）采用Westernblot技術(shù)檢測(cè)血腫灶周?chē)窠?jīng)生長(zhǎng)因子，包括血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VasclarEndothelialGrowthFactor，VEGF）、腦源性神經(jīng)生長(zhǎng)因子（Brain-DerivedNerotrophicFactor，BDNF）和膠質(zhì)細(xì)胞源2首都醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文性神經(jīng)生長(zhǎng)因子（Glialcellline-DerivedNeurotrophicFactor，GDNF）的表達(dá)情況；（3）應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)側(cè)腦室下區(qū)（SubventriclarZone，S
8、VZ）神經(jīng)母細(xì)胞遷移和血腫灶周?chē)律窠?jīng)元情況；（4）以Nissl染色技術(shù)評(píng)估小鼠腦出血后的病理改變。實(shí)驗(yàn)結(jié)果1．以0.03U膠原酶IV立體定向注射至小鼠基底節(jié)區(qū)，腦出血模型穩(wěn)定，神經(jīng)功能缺損癥狀明顯，死亡率低。2．經(jīng)缺氧預(yù)處理的BMSCs細(xì)胞活性及遷移能力明顯增強(qiáng)，與對(duì)照組相比，BMSCs的促紅細(xì)胞生成素（Erythropoietin，EPO），促紅細(xì)胞生成素受體（Erythropoietin，receptor，EPOR）基質(zhì)細(xì)胞衍生因子
