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《ub-hbcag-ctp融合蛋白誘導(dǎo)特異性ctl抑制轉(zhuǎn)基因小鼠hbv復(fù)制的實(shí)驗(yàn)研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文Ub-HBcAg-CTP融合蛋白誘導(dǎo)特異性CTL抑制轉(zhuǎn)基因小鼠HBV復(fù)制的實(shí)驗(yàn)研究碩士研究生：卓萌學(xué)號(hào)：1127259584導(dǎo)師：湯正好專業(yè)：內(nèi)科學(xué)（感染病學(xué)）研究方向：慢性乙型肝炎的臨床與基礎(chǔ)治療申請(qǐng)級(jí)別：碩士（專業(yè)學(xué)位）培養(yǎng)單位：上海交通大學(xué)附屬第六人民醫(yī)院基金項(xiàng)目：國家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目（81270502）上海市自然科學(xué)基金（11ZR1427100）答辯日期：2015年4月30日DissertationSubmittedtoShanghaiJiaoTongUniversityforthedegreeofMasterT
2、HEEXPERIMENTALSTUDYOFSPECIFICCTLSINDUCEDBYUB-HBCAG-CTPTOINHIBITHBVREPLICATIONPh.Dcandidate:MengZhuoStudentID:1127259584Supervisor:Prof.ZhenghoTangMajor:InternationalMedicine(InfectiousDiseases)ResearchField:ClinicalandbasicresearchofchronichepatitisBAffiliated:ShanghaiJiaoTong
3、UniversityaffiliatedtoSixthPeople’sHospitalFundProject:NationalNaturalScienceFoundationofChina(81270502)NaturalScienceFoundationofShanghai(11ZR1427100)DateofDefence:April30,2015上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文Ub-HBcAg-CTP融合蛋白誘導(dǎo)特異性CTL抑制轉(zhuǎn)基因小鼠HBV復(fù)制的實(shí)驗(yàn)研究摘要目的：探討泛素（Ubiquitin）修飾乙肝病毒核心抗原肽（HBcAg）經(jīng)胞質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)肽（CT
4、P）轉(zhuǎn)導(dǎo)在HBV轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)分泌Th1型細(xì)胞因子及HBV特異性細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞（CTL）反應(yīng)，并進(jìn)一步驗(yàn)證融合蛋白Ub-HBcAg-CTP在轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)的抑制HBV病毒復(fù)制功能。方法：1.BALB/c-HBV轉(zhuǎn)基因小鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組Ub-HBcAg-CTP（50μg），對(duì)照組HBcAg-CTP（50μg）、Ub-HBcAg（50μg）、IFN-a（20000IU）、HBcAg（50μg）及空白組（PBS）分別肌肉注射免疫轉(zhuǎn)基因小鼠，每周1次，共免疫3次。通過酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）、固相酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)（ELISPOT）檢測(cè)T淋巴細(xì)胞分
5、泌Th1細(xì)胞因子；流式細(xì)胞術(shù)（FCM）檢測(cè)T淋巴細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞因子；乳酸脫氫酶（LDH）釋放法檢測(cè)T淋巴細(xì)胞的殺傷活性。2.HBV轉(zhuǎn)基因小鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組Ub-HBcAg-CTP（50μg），對(duì)照組HBcAg-CTP（50μg）、Ub-HBcAg（50μg）、IFN-a（20000IU）、HBcAg（50μg）及空白組（PBS）經(jīng)肌肉免疫小鼠，每周1次，共3次。分別于免疫過程中第2周及第4周對(duì)免疫小鼠行內(nèi)眥取血，獲取各組血清共2次，分別通過微粒子酶免疫分析法（MEIA）對(duì)2次小鼠血清行乙型肝炎表面抗原（HBsAg）水平檢測(cè)，熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（PC
6、R）分別測(cè)定2次血清中HBVDNA水平，并用免疫生化檢測(cè)末次血清的AST、ALT水平，同時(shí)對(duì)免疫后小鼠肝臟組織行HE染色及免疫組織化學(xué)檢測(cè)肝組織中HBsAg、HBcAg蛋白表達(dá)水平。結(jié)果：1.實(shí)驗(yàn)組融合蛋白Ub-HBcAg-CTP能有效誘導(dǎo)HBV轉(zhuǎn)基因小鼠T淋巴細(xì)胞分泌Th1型細(xì)胞因子；FCM檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組融合蛋白能有效增加特異性CTL數(shù)量，所誘導(dǎo)的CTL水平明顯高于其他組；且Ub-HBcAg-CTP融合蛋白誘導(dǎo)的T淋巴細(xì)胞CTL活性明顯高于對(duì)照組及空白組（p值均<0.05）。2.Ub-HBcAg-CTP融合蛋白免疫轉(zhuǎn)基因小鼠后，實(shí)驗(yàn)組小鼠血清中HBs
7、Ag及HBVDNA水平較其他對(duì)照組均明顯降低，表示Ub-HBcAg-CTP對(duì)轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)HBV水平有一定抑制作V上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文用，且Ub-HBcAg-CTP組小鼠血清中AST、ALT水平高于其他對(duì)照組（p值均<0.05）。同時(shí)實(shí)驗(yàn)組小鼠肝臟組織HE染色顯示炎性細(xì)胞的數(shù)量明顯增多，而免疫組化分析顯示其肝組織中HBsAg、HBcAg蛋白表達(dá)量明顯減少。結(jié)論：強(qiáng)制泛素修飾抗原肽HBcAg經(jīng)CTP轉(zhuǎn)導(dǎo)免疫HBV轉(zhuǎn)基因小鼠，能夠刺激小鼠體內(nèi)T淋巴細(xì)胞分泌Th1型細(xì)胞因子（IL-2和IFN-γ）及有效提高體內(nèi)特異性CTL的表達(dá)水平，同時(shí)能增強(qiáng)T淋巴
8、細(xì)胞CTL活性。Ub-HBcAg-CTP融合蛋白免疫HBV轉(zhuǎn)基因小鼠后能增加小鼠體內(nèi)HBV特異性CTL數(shù)量，從而有效降低血
