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《基于越橘果實轉錄組測序wbc型abc轉運蛋白的基因發(fā)掘、克隆和表達分析》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、分類號：S663.4單位代碼：10193密級：公開學號：2012046碩士學位論文基于越橘果實轉錄組測序WBC型ABC轉運蛋白的基因發(fā)掘、克隆和表達分析GeneDiscovery,CloneandExpressionAnalysisofWBCTypeABCTransportersBasedonBlueberryFruitTranscriptome作者姓名：康立敏學位類別：農(nóng)學碩士專業(yè)名稱：果樹學研究方向：果樹遺傳育種與生物技術指導教師：李亞東教授所在學院：園藝學院2015年6月獨創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學位論文是本人在導師指導下，獨立進行
2、研究所取得的成果。盡我所知，除文中特別加以標注和致謝所列內容外，論文中不包含其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得吉林農(nóng)業(yè)大學或其它教育機構的學位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。本學位論文所有內容若有不實之處，本人愿意承擔一切相關法律責任和后果。學位論文作者簽名：簽字日期：年月日關于學位論文使用授權的聲明1、本人完全了解吉林農(nóng)業(yè)大學有關保留和使用學位論文的規(guī)定，即：研究生在校攻讀學位期間所完成的論文及相關成果的知識產(chǎn)權屬吉林農(nóng)業(yè)大學所有，并同意將本論文的版權
3、授權給吉林農(nóng)業(yè)大學，學校有權保留送交論文的復印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編學位論文。2、本人（同意/不同意，務必打印后填寫）吉林農(nóng)業(yè)大學將本論文版權授權給不同媒體進行電子出版、多媒體出版、網(wǎng)絡出版以及其他形式出版（涉密學位論文解密后應遵守此協(xié)議）。3、本人聲明畢業(yè)后若發(fā)表在攻讀研究生學位期間完成的論文及相關的學術成果，必須以吉林農(nóng)業(yè)大學作為第一署名單位。學位論文作者簽名：簽字日期：年月日指導教師簽名：簽字日期：年月日摘要腺苷三磷酸結合盒轉運蛋白（ATP-bindingcassettetranspo
4、rter，ABC轉運蛋白）是廣泛存在于原核生物與真核生物中的一類超家族的跨膜蛋白，大多數(shù)ABC轉運蛋白都能夠與ATP結合并通過水解ATP釋放能量從而調控物質的跨膜運輸，其運輸?shù)孜锇ò被?、多糖、多肽、金屬離子、生物堿、酚類、萜類、蠟和藥物等，ABC轉運蛋白在植物次生代謝物質的累積與轉運過程中發(fā)揮著重要作用。根據(jù)ABC轉運蛋白的保守序列的同源性與結構域的組成形式，可以將ABC轉運蛋白分為九大亞家族（ABCA-ABCI）。WBC（whitebrowncomplex）型轉運蛋白是ABCG亞家族的一個成員，為了從分子水平研究越橘中WBC型轉運蛋白對次
5、生代謝物質的累積與轉運的機制，本試驗以越橘（Vacciniumspp.）“北陸”（V.corymbosumL.）根、莖、葉芽、葉、花芽、花、綠果、粉果、藍果、藍果種子、藍果果皮和藍果果肉為試材，對越橘中經(jīng)轉錄組測序篩選出了的7個顯著上調表達的基因和一個下調表達基因中在果皮中表達量最高的Unigene10823_All進行了實時熒光定量PCR（Real-timefluorescencequantitativePCR，qRT-PCR）分析，研究其在越橘各個器官和果實發(fā)育不同階段中的表達模式，并成功克隆Unigene10823_All的全長序列，命名
6、為VcWBC3。主要試驗分析結果如下：（1）基于越橘轉錄組測序的分析結果共獲得21條編碼WBC型轉運蛋白的Unigenes，10條基因上調表達（果肉中的表達量低于果皮），其中7條基因顯著上調表達；11條基因下調表達（果肉中的表達量高于果皮）。（2）VcWBC轉運蛋白在越橘各個組織器官中都有表達，但存在表達量的差異。Unigene14517_All和Unigene29820_All分別在莖和藍果中表達量最高；Unigene5067_All和Unigene27766_All在根中表達量最高；Unigene10823_All和Unigene27928
7、_All在花中表達量最高；Unigene34381_All和Unigene34438_All表達情況相似，從綠果、粉果到藍果表達量呈遞增趨勢。（3)VcWBC3基因的cDNA的全長序列含有2157bp的開放閱讀框（openreadingframe，ORF），編碼718個氨基酸，蛋白質分子量為78.71kDa，等電點為7.54，屬于不穩(wěn)定性蛋白；VcWBC3蛋白的二級結構中含有267個α螺旋（37.19%），264個無規(guī)卷曲（36.77%），125個延伸鏈（17.41%）和62個β轉角（8.64%）；VcWBC3含有一個信號肽和3個跨膜結構域，其
8、主要定位在細胞質膜上，且為親水性蛋白；VcWBC3基因和其它植物中編碼的氨基酸序列具有ABC轉運蛋白家族普遍存在的“WalkerA”、“WalkerB
