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《基于轉(zhuǎn)錄組測序篩選及克隆棉花抗黃萎病相關(guān)基因》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、密級:論文編號:中囯農(nóng)業(yè)科學(xué)按:基于轉(zhuǎn)錄組測序篩選及克隆棉花抗黃萎病相關(guān)基因ScreeningandCloningResistanceGenestoCottonVerticilliumWiltBasedootheTranscriptomeSequencing碩士研宄生.?邵冰欣指導(dǎo)教師：王紅梅研究員申請學(xué)位類別：農(nóng)學(xué)碩士專業(yè)：彳詞如^傳育種研宄方向：_麵對專育和娌論與方^培養(yǎng)單位：中國農(nóng)獅花研究所中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院研宄生院2015年6月密級:論文編號:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院學(xué)位論文基于轉(zhuǎn)錄組測序篩選及克隆棉花抗黃萎病相關(guān)基因ScreeningandCloningResistanceGenestoCo
2、ttonVerticilliumWiltBasedontheTranscriptomeSequencing碩士研究生：邵冰欣指導(dǎo)教師：王紅梅研究員申請學(xué)位類別：農(nóng)學(xué)碩士專業(yè)：作物遺傳育種研究方向：作物遺傳育種理論與方法培養(yǎng)單位：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院棉花研究所中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院研究生院2015年6月Secrecy:No.ChineseAcademyofAgriculturalSciencesDissertationScreeningandCloningResistanceGenestoCottonVerticilliumWiltBasedontheTranscriptomeSequencingM.S
3、.Candidate：ShaoBingxinSupervisor：Prof.WangHongmeiMajor：CropGeneticsandBreedingSpecialty:TheoriesandMethodsofCropGeneticsandBreedingJune2015本人聲明所呈交的論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人己經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院或其它教育機構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。研
4、究生簽名時間：pAS年：月pH關(guān)于論文使用授權(quán)的聲明本人完全了解中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，5卩：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同意中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。研究生簽名時間：7^夕年1月>円導(dǎo)師簽名:時間：>(7丨$年6月/閂答辯主席摘要棉花黃萎病嚴重影響棉花的產(chǎn)量和品質(zhì)，阻礙了我國棉花的生產(chǎn)發(fā)展。隨著分子生物學(xué)和基因工程的快速發(fā)展，利用生物技術(shù)研究棉花抗黃萎病機制和克隆與棉花抗黃萎病相關(guān)基因已經(jīng)成為當前研究熱點。本研究利用本課題已
5、構(gòu)建的黃萎病菌誘導(dǎo)的棉花轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫，結(jié)合在棉花D基因組中鑒定的抗病R基因篩選出與棉花抗黃萎病相關(guān)的候選抗病基因，并通過熒光定量PCR分析其在黃萎病菌誘導(dǎo)后的表達趨勢。從候選抗病基因中選擇兩個GbDRP66319和GbHIR42734進行基因克隆、生物信息學(xué)分析，并通過VIGS技術(shù)初步驗證其功能。研究結(jié)果如下：1、在本課題已經(jīng)獲得與棉花抗黃萎病性狀顯著關(guān)聯(lián)的分子標記兩端800kb范圍內(nèi)尋找含有NBS-LRR類R基因共64個，以R基因比對黃萎病菌誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫，獲得與之高度同源的Unigenes，從中選擇顯著差異表達的24個Unigenes進行熒光定量PCR，其在黃萎病菌誘導(dǎo)后的表達趨
6、勢，結(jié)果顯示黃萎病菌誘導(dǎo)后相比對照表達量總體呈上調(diào)，但是不同基因的表達模式又存在差異。大致可總結(jié)為兩種情況：一種是誘導(dǎo)4h后上調(diào)表達，即瞬時基礎(chǔ)防御；另一種情況是在誘導(dǎo)12h后上調(diào)表達，即滯后特異性防御。2、本文通過同源基因克隆法，對GbDRP66319和GbHIR42734的編碼區(qū)進行克隆，測序結(jié)果顯示GbDRP66319基因的CDS編碼區(qū)為879bp，編碼292個氨基酸。通過TMHMM軟件分析跨膜結(jié)構(gòu)域，該蛋白沒有跨膜結(jié)構(gòu)域。GbDRP66319與棉花A和D基因組數(shù)據(jù)庫比對，獲得29個同源基因，根據(jù)SMART等軟件分析保守結(jié)構(gòu)域，結(jié)果顯示其含有P-loop，Kinase2，Kinas
7、e3，GLPLandMHDL五個motifs，以及LRR_BAC，LRR_CC和LRR_TYP等抗病基因的保守結(jié)構(gòu)域。GbHIR42734CDS編碼區(qū)為855bp，編碼284個氨基酸。通過TMHMM軟件分析跨膜結(jié)構(gòu)域，該蛋白沒有跨膜結(jié)構(gòu)域。GbHIR42734與棉花A和D基因組數(shù)據(jù)庫比對，獲得6個同源基因，該類蛋白均含有植物過敏反應(yīng)誘導(dǎo)的家族蛋白的保守結(jié)構(gòu)域SPFH（Stomatins、Prohibitin、Flo-tillins、
