表柔比星序貫nk細(xì)胞體外殺傷乳腺癌細(xì)胞的研究

《表柔比星序貫nk細(xì)胞體外殺傷乳腺癌細(xì)胞的研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。

1、表柔比星序貫NK細(xì)胞體外殺傷乳腺癌細(xì)胞的研究TheeffectofepirubicinsequentialNKcellsagainstbreastcancercellsinvitro作者姓名：董營(yíng)專(zhuān)業(yè)名稱：內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師：宋艷秋教授學(xué)位類(lèi)別：醫(yī)學(xué)碩士答辯日期：2015年6月3日前言含蒽環(huán)類(lèi)藥物化療方案是臨床上乳腺癌治療公認(rèn)的一線化療方案。蒽環(huán)類(lèi)藥物自上世紀(jì)70、80年代開(kāi)始應(yīng)用于乳腺癌的輔助化療，表柔比星是第一代蒽環(huán)藥物阿霉素的立體異構(gòu)體，雖然在乳腺癌治療占重要地位，但仍不能完全清除腫瘤微小殘余病灶，易產(chǎn)生耐藥性，且毒副反應(yīng)較重，很多患者無(wú)法耐受，大大限制了臨床應(yīng)用和臨床療效，這是乳腺

2、癌治療面臨的一個(gè)大難題，是蒽環(huán)類(lèi)藥物治療乳腺癌關(guān)注的焦點(diǎn)，如何攻克蒽環(huán)類(lèi)藥物存在的負(fù)面問(wèn)題在乳腺癌治療研究中具有非常重要的臨床意義。自然殺傷細(xì)胞（naturekillercells，NK）是人體先天免疫的重要組成部分，主要來(lái)源于骨髓，分布于血液和淋巴器官中，占外周血淋巴細(xì)胞10%~20%，發(fā)揮殺傷作用不需要預(yù)先致敏，不依賴補(bǔ)體和抗體，也不受主要組織相容性合物（majorhistocompatibilitycomplex，MHC）的限制，能直接殺傷腫瘤細(xì)胞，在人體初期抗腫瘤和免疫監(jiān)視中發(fā)揮重要作用。由于NK細(xì)胞人體內(nèi)來(lái)源較少且抗癌活性低，從而限制了在臨床腫瘤治療中的廣泛應(yīng)用。目前已有多項(xiàng)

3、臨床研究報(bào)道了NK細(xì)胞在腫瘤治療中獲得的療效，其安全性和抗腫瘤作用已得到充分的肯定。前期研究我們針對(duì)HER-2陽(yáng)性的乳腺癌細(xì)胞，給予赫賽汀處理后NKG2D活化性配體增加，聯(lián)合NK細(xì)胞后其殺傷作用顯著提高，而化療作為療效確切的抗腫瘤方法己廣泛應(yīng)用于臨床，對(duì)于不應(yīng)用赫賽汀的眾多化療患者，化療藥物處理后能否令乳腺癌細(xì)胞表面NKG2D活化性配體增高呢？關(guān)于化療聯(lián)合NK細(xì)胞治療的研究報(bào)道較少，什么時(shí)機(jī)給予NK細(xì)胞療法更有益于提高抗腫瘤療效，有待于進(jìn)一步的探討。本實(shí)驗(yàn)利用體外誘導(dǎo)擴(kuò)增培養(yǎng)乳腺癌患者的NK細(xì)胞，利用細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)等實(shí)驗(yàn)技能，探究在EPI的影響下，NK細(xì)胞本身是否受到細(xì)胞毒性影

4、響，EPI序貫NK細(xì)胞對(duì)不同乳腺癌細(xì)胞系是否有協(xié)同作用并其作用機(jī)制進(jìn)行探索，以期為下一步臨床腫瘤治療化療結(jié)合免疫治療的時(shí)機(jī)選擇和抗腫瘤療效的提供理論依據(jù)。I中文摘要表柔比星序貫NK細(xì)胞體外殺傷乳腺癌細(xì)胞的研究目的：探討乳腺癌細(xì)胞應(yīng)用表柔比星（Epirubicin，EPI）前后NK細(xì)胞對(duì)其殺傷活性的變化，并對(duì)其機(jī)制進(jìn)行初步探索。方法：選用ER、PR、HER-2表達(dá)情況不同的三種乳腺癌細(xì)胞系，即ER+、PR+、HER-2–乳腺癌細(xì)胞系MCF-7，ER–、PR–、HER-2+++乳腺癌細(xì)胞系SKBR-3和ER–、PR–、HER-2–乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231。應(yīng)用MTT法檢測(cè)不同濃度的

5、EPI作用于乳腺癌細(xì)胞和NK細(xì)胞的增殖抑制作用；應(yīng)用鈣黃綠素-AM釋放法檢測(cè)EPI（5.0μg/ml）序貫NK細(xì)胞對(duì)乳腺癌細(xì)胞殺傷的變化；應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)EPI作用前后乳腺癌細(xì)胞表面NKG2D活化性配體(ULBP1、ULBP2和MICA)表達(dá)情況的變化；EPI序貫NK細(xì)胞作用于乳腺癌細(xì)胞時(shí)，ELISA法檢測(cè)NK細(xì)胞分泌IFN-γ、TNF-α的變化，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)NK細(xì)胞胞內(nèi)穿孔素、顆粒酶B表達(dá)變化情況。結(jié)果：EPI對(duì)乳腺癌細(xì)胞和NK細(xì)胞的增殖均呈現(xiàn)顯著抑制作用，并隨藥物劑量增加和作用時(shí)間延長(zhǎng)抑制率增加；NK細(xì)胞在體外對(duì)乳腺癌細(xì)胞亦存在殺傷作用，并隨效靶比的增加殺傷率增加。選取5.0μ

6、g/mlEPI預(yù)處理12小時(shí)后，NK細(xì)胞對(duì)乳腺癌細(xì)胞的殺傷作用明顯高于EPI未處理組及單獨(dú)給藥組，EPI序貫NK細(xì)胞對(duì)乳腺癌細(xì)胞的殺傷具有協(xié)同效應(yīng)；經(jīng)過(guò)EPI處理后，乳腺癌細(xì)胞表面NKG2D活化性配體（ULBP1、ULBP2、MICA）表達(dá)均顯著增高，NKG2D配體增高可增強(qiáng)NK細(xì)胞的殺傷作用。EPI序貫NK細(xì)胞分泌IFN-γ、TNF-α增多，進(jìn)一步增強(qiáng)NK細(xì)胞的殺傷作用。EPI序貫NK細(xì)胞胞內(nèi)穿孔素和顆粒酶B的表達(dá)水平降低，需進(jìn)一步進(jìn)行研究。II結(jié)論：1、EPI序貫NK細(xì)胞對(duì)乳腺癌細(xì)胞的殺傷具有協(xié)同作用。2.其協(xié)同作用機(jī)制可能與以下兩方面相關(guān)：(1)乳腺癌細(xì)胞表面NKG2D活化性配體

7、表達(dá)上調(diào)；(2)NK分泌IFN-γ、TNF-α增多。3、EPI序貫NK細(xì)胞治療方法適用于大多數(shù)類(lèi)型的乳腺癌細(xì)胞。關(guān)鍵詞:乳腺癌，表柔比星，NK細(xì)胞，免疫治療，協(xié)同作用IIIAbstractTheeffectofepirubicinsequentialNKcellsagainstbreastcancercellsinvitroPurpose:TostudytheroleofEpirubicin(EPI)oncytotoxicityofNKcell