遲緩愛德華氏菌效應物的鑒定及初步功能評價

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1、洗巧每學030120939卿工導:P1還論文■遲緩愛德華氏菌效應物的鑒定及初步gg目.j^^功能評價生物化王;學科專業(yè)研究方向.微生物和分子生物學論文作者:莖壟璧劉琴教授指導教師;20巧年0901定稿日期;月日學位論文使用授權聲明本學位論文作者完全了解學校有關保留、使用學位論文的規(guī)定,同意學校保留并向國家有關部口或機構送交論文的復印件和電子版,允許論文被查閱和借閱。本人授權華東理工大學可W將本學位論文的全部或部分內容編入有關數據庫進行檢索,可W

2、采用影印、縮印或掃描等復制手段保存和匯編學位論文。保密論文在解密后遵守此規(guī)定。論文涉密情況:回/不保密□保密,保密期(年月日至年_月日)_____學位論文作者簽名;指導老師簽名:/日期:批杉年月日日期:如杉年!口月y日分類號:QW乂9密級:UDC:華東理工大學學位論文遲緩愛德華氏菌效應物的鑒定及巧步功能評價黃亞巧指導教師姓名:劉琴教授華東理工大學生物工程學院申請學位級別:碩壬專業(yè)名稱:生物化工.01論文答辯日期..論文定稿日期;201

3、5.09:20151015學位授予單位:華東理工大學學位授予日期:答辯委員會主席:張元興教授評閩人;王啟要教授陳波研究員作者聲明我鄭重聲明:本人恪守學術道德,崇尚嚴謹學風。所呈交的學位論文,是本人在導師的指導下,獨立進行研究工作所取得的結果。除了文中明確注明和引用的內容外,本文不包含任何他人己經發(fā)表或撰寫過的內容。論文為本人親自撰寫,并對所寫內容負責。論文作者簽名:年〇月V日((華東理工大學碩±學位論文第I頁遲緩愛德華氏菌效應物的鑒定及初步功能評價摘

4、要’?e化一遲緩愛德華氏菌陽油成zI化n虹)是種重要的水產養(yǎng)殖病原菌,可引發(fā)海水魚類患腹水病、敗血癥等,造成重大損失。本實驗室從先期感染愛德華氏菌的大菱解上分離獲得強毒株E曲202,并通過轉錄紀學研究及其他篩選策略篩選出25個候選效應物。本文著重對其中4個效應物ETAE0866、ETAE17巧、ETAE2186和ETAE2428進行____了分泌和轉運特性分析,并考察了它們在細菌黏附、內化及斑馬魚毒力方面的作用。首先-,構建了表達效應物P內醜胺酶誕合蛋白的質粒,轉入Efi202、AT3SS、A

5、T6SS苗株中獲得一系列重組菌株。利用胞外分泌蛋白免疫印跡分析、巧光能量共振轉移FRET(),鑒定出ETAE0866和ETAEJ757依賴于H型分泌系統(tǒng)T3SS進行分泌轉運,_()ETAE-21%依賴于T3SS轉運,而ETAE—2428則依賴于六型分泌系統(tǒng)(T能句進行分泌和轉運。利用免疫巧光技術和細胞質膜組分蛋白免疫印跡,發(fā)現ETAE0866和_ETAE_2428轉運到細胞內后主要定位于細胞膜組分中,ETAE_2186定位于細胞質組分。中,而ETAE1757則可能定位于細胞核中上述研究綜合分析

6、并確定了4個5曲202的_效應物的分泌轉運特性及胞內定位情況。其次,分別構建了上述效應物的單基因缺失株A0866、A1757、A2186和A2428并利用細胞模型比較了缺失株在細胞黏附、內化和増殖方面與巧生株的差異。結果表明,A2428在非吞隨細胞感染模型上具有顯著増強的黏附、內化的能力,同時A2428在巨礎細胞感染后期的增殖能力顯著增強。隨后,在斑馬魚模型上進行攻毒試驗,發(fā)現A2428具有更好的減毒效果,表明ETAE2428在EIB202的毒力機制中扮演著非常重要的角色。_最后,對上述

7、4個效應物進行了表達和純化,并成功獲得ETAE2428純化樣品,_為該效應物的結構和功能研究奠定了基礎。上述工作對進一步探究遲緩愛德華氏菌T3SS和T6SS效應物的功能及其與宿主細胞之間的相互作用機制奠定了基礎。關鍵詞:遲緩愛德華氏菌;巧SS;T6SS;效應物第n頁華東理工大學碩±學位論文Iden村ficationandpreliminaryfunctionalevaluationofEdwardsiellatardaeffectorsEdwardsiellatar

8、daisanimportantpathogenicbacteriumintheaquacultureofeconomicallyimportantfishspecies.Itsinfectio打usuallyleads化hugelossesduetotheoutbreaksofthein

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