鞭毛蛋白增強狂犬病疫苗免疫效果的研究

《鞭毛蛋白增強狂犬病疫苗免疫效果的研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。

1、密級：論文編號：中囯農(nóng)業(yè)科學(xué)院學(xué)位論文鞭毛蛋白增強狂犬病疫苗免疫效果的研究TheResearchofImmunoenhancewithFlagellinasanAdjuvanttoRabiesVaccine碩士研宄生：肖星星指導(dǎo)教師：殷相平副研宄員申請學(xué)位類別：獸醫(yī)碩士專業(yè)領(lǐng)域名稱：獸醫(yī)培養(yǎng)單位：蘭州獸醫(yī)研宄所研究生院2015年5月密級:論文編號:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院學(xué)位論文鞭毛蛋白增強狂犬病疫苗免疫效果的研究TheResearchofImmunoenhancewithFlagellinasanAdjuvanttoRabiesVaccine碩士研究生：肖星星指導(dǎo)教師：殷相平

2、副研究員申請學(xué)位類別：獸醫(yī)碩士專業(yè)領(lǐng)域名稱：獸醫(yī)培養(yǎng)單位：蘭州獸醫(yī)研究所研究生院2015年5月Secrecy:No.ChineseAcademyofAgriculturalSciencesDissertationTheResearchofImmunoenhancewithFlagellinasanAdjuvanttoRabiesVaccineM.S.Candidate：XiaoXingxingSupervisor：Prof.YinXiangpingDegree：MasterofVeterinarianSpecialty:VeterinarianMay2015摘要狂犬病

3、又稱恐水病，是由狂犬病病毒引起的、迄今為止人類唯一病死率幾乎高達100%的人畜共患中樞神經(jīng)系統(tǒng)傳染病，嚴(yán)重威脅人們的生命安全。目前為止，狂犬病尚無有效的治療方法?？袢∫呙绲木o急預(yù)防接種是預(yù)防狂犬病病毒感染的最有效方法之一。目前，我國動物使用的狂犬病疫苗主要是弱毒活疫苗。但由于弱毒苗存在毒力回復(fù)、突變等潛在的安全隱患問題，WHO曾表明家養(yǎng)動物不適合用弱毒苗免疫。所以，要防治狂犬病的發(fā)生重要的是研制出更安全有效的疫苗。腺病毒活載體疫苗因其自身的優(yōu)越性和應(yīng)用的廣泛性，已被應(yīng)用于狂犬病基因工程疫苗的研究。鞭毛蛋白是鞭毛的主要組成成分。它不僅在細(xì)菌運動方面起著重要作用，而且也

4、可以與表達于上皮細(xì)胞、單核細(xì)胞和未成熟的樹突狀細(xì)胞的頂端和基底外側(cè)的TLR5受體結(jié)合，從而誘導(dǎo)分泌前炎性因子和細(xì)胞因子，介導(dǎo)激活T細(xì)胞和B細(xì)胞應(yīng)答。因此，鞭毛蛋白可以作為疫苗佐劑，增強疫苗的免疫效果，具有良好的應(yīng)用前景。本試驗成功表達并純化了鞭毛蛋白FljB、FliC和FljB’-FliC。純化的蛋白與狂犬病毒滅活疫苗（whole-killedrabiesvaccine,WKRV）一起免疫小鼠。小鼠共五組：（(1)PBS;(2)WKRV;(3)WKRV和10μgFljB;(4)WKRV和10μgFliC;(5)WKRV和10μgFliB’-FliC。每組10只小鼠，每

5、隔兩周進行一次免疫，共免疫兩次。在免疫后0天、7天、14天、21天、28天和35天采血，通過ELISA的方法檢測抗體水平。用ELISPOT的方法檢測細(xì)胞因子IL-4和IFN-γ的變化。抗體結(jié)果表明：FljB有望成為WKRV的佐劑；免疫了FliC后能夠提高免疫反應(yīng)，但效果不明顯；FljB’-FliC不能提高WKRV的體液免疫反應(yīng)。細(xì)胞因子檢測結(jié)果表明：FljB誘導(dǎo)產(chǎn)生的Th1和Th2免疫反應(yīng)要強于FliC；FliB’-FliC不能增強細(xì)胞免疫反應(yīng)。本試驗采用腺病毒表達系統(tǒng)，構(gòu)建了表達狂犬病毒G蛋白、G蛋白與鞭毛蛋白FljB和G蛋白與FliC的復(fù)制缺陷型重組腺病毒Ad-G

6、、Ad-GB和Ad-GC。用重組腺病毒免疫BALB/c小鼠，每隔兩周免疫一次，共免疫三次。在免疫后0天、14天、28天、35天和42天采血，通過間接ELISA的方法檢測狂犬病毒G蛋白的抗體IgG水平。通過ELISPOT的方法檢測細(xì)胞因子IL-4和IFN-γ的變化。用FCM進行了CD3+CD4+T細(xì)胞和CD3+CD8+T細(xì)胞的檢測?？贵w檢測結(jié)果表明：FljB和FliC均有增強體液免疫的作用，并且FljB比FliC的效果好。細(xì)胞因子檢測結(jié)果表明：FljB和FliC均有增強細(xì)胞免疫的作用，并且FljB比FliC的效果好。FCM檢測結(jié)果表明：FljB和FliC均能夠增強誘導(dǎo)T

7、h和Tc細(xì)胞的增殖。綜上所述，鞭毛蛋白FljB和FliC無論是在狂犬病毒滅活疫苗中還是在腺病毒共表達G蛋白和鞭毛蛋白的基因工程疫苗中，均有免疫增強作用。并且，F(xiàn)ljB總體上來說比FliC的增強效果更顯著。表明了FljB有望成為狂犬病疫苗的佐劑，從而為研制安全、高效的狂犬病疫苗提供一定的參考作用。關(guān)鍵詞：狂犬病疫苗，原核表達，鞭毛蛋白，腺病毒載體，免疫IAbstractRabies,alsoknownashydrophobia,istheonlyhumanfatalityratealmostupto100%ofthezoonoticandcentral