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1、密級(jí)：論文編y:中囯農(nóng)業(yè)科學(xué)院大眼長(zhǎng)蝽卵黃原蛋白基因克隆、表達(dá)及應(yīng)用研究MolecularCloning,ExpressionandApplicationofVitellogeninGeneinGeocorispallidipennis碩士研究生：梁慧芳指導(dǎo)教師：曾凡榮研究員申請(qǐng)學(xué)位類別：理學(xué)碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子4物學(xué)研究方向：微培養(yǎng)單位：植物保護(hù)研究所研究生院2015年5月中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文評(píng)閱人、答辯委員會(huì)簽名表論文題目大眼長(zhǎng)蝽卵黃原蛋白基因克隆、表達(dá)及應(yīng)用研宄生物化學(xué)與研究方向微生物分子生物學(xué)與基因論文作者梁慧
2、芳專業(yè)分子生物學(xué)^工程培養(yǎng)單位(研究所、中心）植物保護(hù)研宄所指導(dǎo)教師曾凡榮姓名職稱單位專業(yè)簽名評(píng)南京農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)董雙林教授農(nóng)業(yè)昆蟲與害蟲防治學(xué)院閱中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保蔣細(xì)良研宄員微生物學(xué)人護(hù)研究所答辯王琛柱研宄員中國(guó)科學(xué)院動(dòng)物研究所農(nóng)業(yè)昆蟲與害蟲防治主樹L席----j秦玉川教授中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)昆蟲系農(nóng)業(yè)昆蟲與害蟲防治中國(guó)林科院森林生態(tài)環(huán)張永安研宄員植物保護(hù)答境與保護(hù)研究所北京市農(nóng)林科學(xué)院植保辯張帆研宄員農(nóng)業(yè)昆蟲與害蟲防治環(huán)境研究所1中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究委陳乃中研究員農(nóng)業(yè)昆蟲與害蟲防治院動(dòng)植物檢疫研宂所'5bf中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保
3、員農(nóng)業(yè)昆蟲與害蟲防治雷仲仁研究員護(hù)研究所中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保1侯茂林研宄員農(nóng)業(yè)昆蟲與害蟲防治護(hù)研究所會(huì)議記錄（秘書）王孟卿論文答辯時(shí)間地點(diǎn)2015年5月29日上午9時(shí)植保所植保樓第一會(huì)議室獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研宄工作及取得的研宄成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人己經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均己在論文中作了明確的說明并表示了謝意。研究生簽名:[^年上月
4、多0日關(guān)于論文使用授權(quán)的聲明本人完全了解中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同意中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。研究生簽名:讀雙茗時(shí)間：年上月介日密級(jí):論文編號(hào):中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院學(xué)位論文大眼長(zhǎng)蝽卵黃原蛋白基因克隆、表達(dá)及應(yīng)用研究MolecularCloning、ExpressionandApplicationofVitellogeninGeneinGeoc
5、orispallidipennis碩士研究生：梁慧芳指導(dǎo)教師：曾凡榮研究員申請(qǐng)學(xué)位類別：理學(xué)碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究方向：微生物分子生物學(xué)與基因工程培養(yǎng)單位：植物保護(hù)研究所研究生院2015年5月Secrecy:No.ChineseAcademyofAgriculturalSciencesDissertationMolecularCloning、ExpressionandApplicationofVitellogeninGeneinGeocorispallidipennisM.S.Candidate：LiangHuifa
6、ngSupervisor：ProfessorZengFanrongMajor：BiochemistryandMolecularBiologySpecialty:MicrobialMolecularBiologyandGeneticEngineeringMay,2015摘要大眼長(zhǎng)蝽Geocorispallidipennis是一種重要的捕食性天敵昆蟲，是棉花、煙草等作物害蟲的主要天敵，在害蟲生物防治的應(yīng)用中具有廣闊前景。近年來，對(duì)大眼長(zhǎng)蝽的研究主要集中在形態(tài)特征，生活習(xí)性等生態(tài)學(xué)和捕食功能上，對(duì)其繁殖關(guān)鍵因子——卵黃原蛋白的研究未見
7、報(bào)道。本文克隆了大眼長(zhǎng)蝽卵黃原蛋白基因，研究了大眼長(zhǎng)蝽卵黃原蛋白基因的分子特征，同時(shí)本研究表達(dá)了37KDa蛋白，明確了37KDa蛋白對(duì)大眼長(zhǎng)蝽生長(zhǎng)繁殖的影響，為人工飼料的改進(jìn)和天敵昆蟲的大規(guī)模繁殖提供了理論基礎(chǔ)和相關(guān)技術(shù)。本論文研究結(jié)果如下：1.利用RT-PCR和RACE技術(shù)克隆得到了大眼長(zhǎng)蝽卵黃原蛋白（Vg）基因全序列。該基因cDNA全長(zhǎng)5667bp（GenBank登錄號(hào)：KP688587），編碼1848個(gè)氨基酸殘基，N-末端的前19個(gè)氨基酸為信號(hào)肽。序列分析顯示該卵黃原蛋白序列具有昆蟲卵黃原蛋白所特有的保守基序和RXXR酶切
8、位點(diǎn)。編碼的氨基酸序列比對(duì)顯示與半翅目昆蟲Vg氨基酸序列相似度較高，表明克隆的cDNA序列是大眼長(zhǎng)蝽的Vg基因序列。2.ELISA檢測(cè)發(fā)現(xiàn)隨著發(fā)育時(shí)間的延長(zhǎng)，卵黃原蛋白表達(dá)量逐漸增加，羽化后22天達(dá)到高峰，隨后開始下降。本研究利用已克隆的大眼長(zhǎng)蝽卵黃原蛋白基因序
