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《桑樹花青素相關(guān)基因的克隆及表達(dá)和ans基因表達(dá)載體的構(gòu)建》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、學(xué)校代碼：10289分類號：Q5密級：公開學(xué)號：122300006江蘇科技大學(xué)碩士學(xué)位論文桑樹花青素相關(guān)基因的克隆及表達(dá)和ANS基因表達(dá)載體的構(gòu)建研究生姓名雷朋導(dǎo)師姓名吳瓊英潘剛申請學(xué)位類別理學(xué)碩士學(xué)位授予單位江蘇科技大學(xué)學(xué)科專業(yè)生物化學(xué)與分子生學(xué)論文提交日期2015年4月27日研究方向桑樹遺傳育種論文答辯日期2015年6月3日答辯委員會主席程嘉翎評閱人2015年6月3日分類號：Q5密級：公開學(xué)號：122300006理學(xué)碩士學(xué)位論文桑樹花青素相關(guān)基因的克隆及表達(dá)分析和ANS基因表達(dá)載體的構(gòu)建學(xué)生姓名雷朋指導(dǎo)教師吳瓊英
2、副教授潘剛副研究員江蘇科技大學(xué)二O一五年六月AThesisSubmittedinFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofScienceMolecularcloningandexpressionanalysisofanthocyaningenesfromMulberry(Morusmulticaulis),andConstructionexpressionvectorofANSgeneSubmittedbyLeiPengSupervisedbyAssociat
3、eProfessorWuQiongyingPangangJiangsuUniversityofScienceandTechnologyJun,2015江蘇科技大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，對本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明并表示謝意。本人完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名：日期：江蘇科技大學(xué)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書
4、本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)江蘇科技大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。本學(xué)位論文屬于：(1)保密□，在年解密后適用本授權(quán)書。(2)不保密?。學(xué)位論文作者簽名：指導(dǎo)教師簽名：年月日年月日摘要摘要桑樹是多年生的重要經(jīng)濟(jì)作物，屬?？粕伲羌倚Q的唯一飼料。桑樹經(jīng)長期的自然選擇和人工選育，形成了豐富的桑樹種質(zhì)資源。但是，與其它植
5、物相比我們在桑樹功能基因研究等方面都處于落后狀態(tài)。因此，研究桑樹一些重要的基因及其脅迫環(huán)境下的分子作用機制，有利于提高桑葉產(chǎn)量及桑樹資源的培養(yǎng)和保存。本文通過抑制消減雜交技術(shù)和同源性基因克隆獲得了桑樹的3個差異顯著的ESTs序列，并根據(jù)獲得的序列結(jié)合RT-PCR和RACE技術(shù)克隆得到了2個基因的全長cDNA序列。利用脅迫誘導(dǎo)和熒光定量PCR的方法對2個基因進(jìn)行功能驗證和表達(dá)分析。同時從桑樹中克隆出了ANS基因序列，經(jīng)過酶切、連接到表達(dá)載體1302上，為以后轉(zhuǎn)到擬南芥上進(jìn)行功能研究做準(zhǔn)備。本文主要研究內(nèi)容如下：（1）桑
6、樹紫芽與綠芽的消減抑制雜交花青素與桑樹嫩芽的顏色表現(xiàn)有關(guān)，桑樹中與花青素合成及調(diào)節(jié)相關(guān)的基因很多，本文以桑樹紫芽與綠芽為材料，進(jìn)行消減抑制雜交。所得雜交產(chǎn)物通過瓊脂糖凝膠電泳得到差異條帶群，可以看到差異顯著的三個條帶，進(jìn)行回收測序，得到其中2條條帶的EST序列。獲得的EST序列經(jīng)Blast比對和同源性分析，其中一條可能與花青素有關(guān)。（2）桑樹兩個花青素相關(guān)基因的全長克隆及脅迫情況下的表達(dá)分析從消減抑制雜交中獲得的EST序列和從已構(gòu)建的桑樹幼葉cDNA文庫得到了一個與花青素相關(guān)基因CHS3的一段序列，通過RACE與RT
7、-PCR結(jié)合的方法獲得了兩個基因的全長，并命名為Ma-TCTP（基因登錄號：KP228013）和Ma-CHS3。序列分析表明，Ma-TCTP該基因cDNA全長841bp，包括101bp的5′-UTR、233bp的3′-UTR，ORF為507bp,編碼168個氨基酸，蛋白質(zhì)分子質(zhì)量為18.7362kD,等電點為4.53。同源分析表明，Ma-TCTP基因在各物種間具有很高的保守性。Ma-CHS3該基因cDNA全長1234bp，包括215bp的3′-UTR，ORF為1017bp，編碼338個氨基酸，蛋白質(zhì)分子質(zhì)量為36.7
8、018kD，等電點為7.58。同源性分析表明，該基因與CHS同族基因序列相似性很高?；ㄇ嗨叵嚓P(guān)基因不僅與顏色有關(guān)，還與植物的抗逆性有關(guān)，定量PCR結(jié)果表明，Ma-TCTP和Ma-CHS3基因mRNA的轉(zhuǎn)錄水平在不同組織及低溫、高溫脅迫下的均有所不同，但其具體機制還有待進(jìn)一步研究。（3）桑樹ANS基因的表達(dá)載體構(gòu)建從NCBI中已經(jīng)得到的ANS序列
