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《擬南芥atmyb61基因的克隆及表達(dá)載體構(gòu)建》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、擬南芥AtMYB61基因的克隆及表達(dá)載體構(gòu)建王云，任永兵，楊碩，韓宇，陶楊，曹樹青(合肥工業(yè)大學(xué)生物與食品工程學(xué)院，安徽合肥230009)摘要：文章以擬南芥幼苗提取的總RNA為模板，利用RT-PCR技術(shù)擴(kuò)增獲得AtMYB61基因的全長cDNA片段，再克隆到pUCm-T載體上，菌落PCR、酶切鑒定和cDNA測序結(jié)果表明成功克隆了擬南芥AtMYB61基因。從AtMYB61一pUCm-T載體上，用BstEII和BglII全雙酶切切下目的基因片段，將此基因片段連接到植物表達(dá)載體pCAMBIA2301中。菌落PCR和
2、酶切鑒定結(jié)果表明成功構(gòu)建了植物表達(dá)載體pCAMBIA2301一AtMYB61。利用電轉(zhuǎn)化法將重組表達(dá)載體導(dǎo)人根癌農(nóng)桿菌中，獲得了攜帶AtMYB61基因的根癌農(nóng)桿菌株，為轉(zhuǎn)基因改良植物抗逆性和進(jìn)一步研究A￡MyB61基因的抗逆分子機(jī)理奠定了基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：擬南芥；AtMYB61基因；表達(dá)載體CloningofArabidopsisthalianaAtMYB61geneandtheexpressionvectorconstructionWANGYun，RENYong-bing，YANGShuo，HANYu，TAO
3、Yang，CAOShu-qing(SchoolofBiotechnologyandFoodEngineering，HefeiUniversityofTechnology，Hefei230009，China)Abstract：Tota1RNAwasextractedfromArabidopsisthalianaseedlingsandusedasthetemplatetoamplifythefulllengthofeDNAofAtMYB61genebyRT_PCRtechnology，andthegenefr
4、agmentwassubsequentlyclonedintoplantpUCm-Tvector．TheresultsofbacterialcolonyPCR，enzymeanalysisandeDNAsequencingconfirmedthattheArabidopsisthalianaAtMYB61genewassuccessfullycloned．AtMYB61genewascutcompletelyfromAtMYB61一pUCm-TvectorbyBstE1]andBglⅡ，andthegene
5、fragmentwasclonedintoplantexpressionvectorpCAMBIA2301．TheresultsofbacterialcolonyPCRandenzymeanalysisshowedtheSuccessfu1constructionofplantexpressionvectorpCAM—BIA2301一AtMYB61．Inaddition，therecombinantexpressionvectorwascarriedintoAgrobacteriumtumefaciensb
6、yelectrotransformation，andthestrainofAgrobacteriumtumefacienscarryingAtMYB61genewasobtained．ThestudyprovidesabasisforimprovingtheresistanceoftransgenicplantsandfurtherexploringthemolecularmechanismofAtMYB61gene．Keywords：Arabidopsisthaliana；AtMYB61gene；expr
7、essionvector0引言隨著一些抗逆基因的鑒定和抗逆機(jī)理不斷深入研究，將外源抗逆基因?qū)酥参锏幕蚬こ碳夹g(shù)，在提高植物抗逆性方面具有更廣泛的應(yīng)用前景。但植物的抗逆應(yīng)答是一系列相關(guān)基因連續(xù)表達(dá)調(diào)控的極其復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。在整個調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中，轉(zhuǎn)錄因子能調(diào)控多個相關(guān)基因的表達(dá)，所以增強(qiáng)轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控是提高植物抗逆性更有效的方法Ⅲ。MYB轉(zhuǎn)錄因子是擬南芥中最大的基因家族。該基因家族主要在植物的生長發(fā)育方面發(fā)揮重要作用，如植物次級代謝、信號傳導(dǎo)、器官形成等方面[3]。另外，也有一部分參與了逆境脅迫介導(dǎo)的細(xì)胞應(yīng)答[4
8、]。大量研究證實(shí)，一些MYB轉(zhuǎn)錄因子的過量表達(dá)可以顯著增加植物對逆境的耐受性L7]。MYB61轉(zhuǎn)錄因子具有DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域和轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)結(jié)構(gòu)域，其功能相當(dāng)廣泛，參與重金屬、低磷和干旱等脅迫的信號調(diào)節(jié)，植物重金屬脅迫與氧化脅迫是相關(guān)的【9]。AtMYB61基因在植物中過量表達(dá)，有利于進(jìn)一步研究AMyB61基因的抗逆分子機(jī)理。因此，本文利用RT-PCR克隆AtMYB61基因，并構(gòu)建了pCAMBIA2301一At—MYB6
