硫化氫對腹膜透析大鼠并發(fā)腹膜纖維化的防治作用

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1、MmSOOCHOWUNIVERSITY》/_/丄論文題目硫化氫對腹膜透析大鼠并發(fā)腹膜纖維化的防治作用研究生姓名高蘆-It---.??.HH?指導(dǎo)教師姓名宋專業(yè)名稱腎臟病學(xué)研究方向腹膜透析論文提交日期2015年3月蘇州大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明s所提交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不含其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不含為獲得蘇州大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位證書而使用過的材料。對本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人承擔(dān)本聲明的法律責(zé)任。論文

2、作者簽名S9]fS>曰期^yO^^-/>蘇州大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人完全了解蘇州大學(xué)關(guān)于收集、保存和使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)位論文著作權(quán)歸屬蘇州大學(xué)。本學(xué)位論文電子文檔的內(nèi)容和紙質(zhì)論文的內(nèi)容相一致。蘇州大學(xué)有權(quán)向國家圖書館、中國社科院文獻(xiàn)信息情報(bào)中心、中國科學(xué)技術(shù)信息研究所（含萬方數(shù)據(jù)電子出版社)、中國學(xué)術(shù)期刊（光盤版）電子雜志社送交本學(xué)位論文的復(fù)印件和電子文檔，允許論文被查閱和借閱，可以釆用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存和匯編學(xué)位論文，可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索。涉密論文口本學(xué)位論文屬在年—月解密后適用本規(guī)定。非涉密

3、論文?/論文作者簽名：為ffe日期：導(dǎo)師簽名：H緊曰期：>01X^0^1}硫化氫對腹膜透析大鼠并發(fā)腹膜纖維化的防治作用中文摘要硫化氫對腹膜透析大鼠并發(fā)腹膜纖維化的防治作用中文摘要目的：本研究探討硫化氫（H2S）是否通過抗炎、抗纖維化作用，改善腹膜透析大鼠腹膜纖維化及腹膜轉(zhuǎn)運(yùn)功能。方法：1.體內(nèi)研究：20只雄性SD大鼠隨機(jī)分為4組：對照組：0.9%生理鹽水20ml/d腹腔注射；硫化氫（H2S）組：NaHS1μmol/kg*d加入0.9%生理鹽水中腹腔注射；建模組：4.25%高糖腹透液(PDFs)20ml/d腹腔注射，第1,3,5,7天加入脂多糖（LP

4、S）0.6mg/kg腹腔注射；治療組：高糖組造模同時(shí)予NaHS1μmol/kg*d腹腔注射。28天后行腹膜平衡試驗(yàn)(PET)，計(jì)算超濾量、D2h葡萄糖/D0h葡萄糖，評估腹膜轉(zhuǎn)運(yùn)功能。取壁層腹膜組織行HE染色、Masson染色等病理染色觀察腹膜和膠原纖維厚度；免疫組化檢測單核/巨噬細(xì)胞標(biāo)志蛋白（ED-1）、單核巨噬細(xì)胞趨化蛋白（MCP-1）、轉(zhuǎn)化生長因子（TGF-β1）、肌纖維蛋白（α-SMA）、纖維黏連蛋白（FN）、膠原蛋白-Ⅲ（Col-Ⅲ）和血小板-內(nèi)皮細(xì)胞粘附因子（CD31）等炎癥纖維化、新生血管形成指標(biāo)的表達(dá)。2.體外研究：取正常SD大鼠，

5、分離培養(yǎng)大鼠原代腹膜間皮細(xì)胞，取第二代至第四代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)研究。將細(xì)胞同步化處理后隨機(jī)分為5組：對照組：細(xì)胞培養(yǎng)于正常培養(yǎng)液中；H2S組：細(xì)胞培養(yǎng)于正常培養(yǎng)液中，同時(shí)予NaHS300μM；建模組：正常培養(yǎng)液:2.5%PDF(V/V)=1:1；H2S低劑量治療組：正常培養(yǎng)液:2.5%PDF(V/V)=1:1，同時(shí)予NaHS100μM；H2S高劑量治療組：正常培養(yǎng)液:2.5%PDF(V/V)=1:1，同時(shí)予NaHS300μM。24小時(shí)后提取細(xì)胞總RNA、蛋白，RT-PCR檢測各組MCP-1、ICAM-1、IL-6炎癥因子mRNA的表達(dá)；Western-

6、blot檢測各組α-SMA、FN等相關(guān)纖維化蛋白的表達(dá)。結(jié)果：1.體內(nèi)研究：與對照組相比，建模組超濾量明顯減少，D2h葡萄糖/D0h葡萄糖比值明顯降低（P<0.05），而治療組、H2S組上述變化不明顯；HE染色示建模組腹膜結(jié)構(gòu)紊I中文摘要硫化氫對腹膜透析大鼠并發(fā)腹膜纖維化的防治作用亂，腹膜厚度、腹膜間皮下炎癥細(xì)胞浸潤及膠原沉積較對照組顯著增加（P<0.05），予NaSH治療后，腹膜厚度、炎癥細(xì)胞浸潤、膠原沉積等明顯減少（P<0.05）；免疫組化示，與對照組相比建模組ED1、MCP-1、TGF-β1、α-SMA、FN、Col-Ⅲ及CD31等蛋白的表達(dá)

7、量顯著增加（均P<0.05）；然而，與建模組相比，治療組ED1、MCP-1、TGF-β1、α-SMA、FN、Col-Ⅲ及CD31的表達(dá)量顯著降低（均P<0.05）。2.體外研究：與對照組相比，建模組腹膜間皮細(xì)胞MCP-1、ICAM-1、IL-6等炎癥因子的表達(dá)明顯增多，α-SMA、FN等蛋白的表達(dá)明顯上調(diào)，予NaHS干預(yù)后上述炎癥、纖維化因子的表達(dá)明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論：1.高糖腹透液可誘導(dǎo)腹膜纖維化。2.外源性H2S對高糖腹透液引起的腹膜纖維化有防治作用。3.H2S改善腹膜透析大鼠腹膜纖維化的機(jī)制是通過抑制炎癥反應(yīng)、降低TGF-β1的表

8、達(dá)，進(jìn)而抑制腹膜間皮細(xì)胞EMT、減少膠原蛋白沉積和新生血管形成而實(shí)現(xiàn)的。關(guān)鍵詞：腹膜透析；腹膜纖維化；炎癥；上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)