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《紅鰭笛鯛和金焰笛鯛視蛋白的體外表達(dá)》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、密學(xué)分類號(hào)：Q786級(jí)：公幵UDC：577號(hào)：2111201123廣瘃海洋太考碩士學(xué)位論文紅鰭笛鯛和金焰笛鯛視蛋白的體外表達(dá)朱惠敏指導(dǎo)教師：郭昱嵩副教授______________申請(qǐng)學(xué)位類別：理學(xué)碩士___________________專業(yè)名稱：海洋生物學(xué)研究方向；海洋經(jīng)濟(jì)動(dòng)物發(fā)育生物學(xué)學(xué)院名稱：水產(chǎn)學(xué)院中國(guó)?湛江2015年6月紅鰭笛鯛和金焰笛鯛視蛋白的體外表達(dá)I摘II要摘要紅鰭笛鯛(Lutjanuserythropterus)和金焰笛鯛(Lutjanusfulviflamma)隸屬于笛鯛科(Lutjanidae)、笛鯛屬(LutjanusBloch)，屬于近海暖水性魚類，紅鰭笛鯛生活于為
2、近底層而金焰笛鯛生活于淺水層，這兩種魚類都是經(jīng)濟(jì)價(jià)值比較的高捕撈品種。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)笛鯛屬魚類的研究集中在在養(yǎng)殖技術(shù)、病理研究、環(huán)境脅迫、系統(tǒng)發(fā)育等方面，在視蛋白基因方面的研究甚少。本論文以紅鰭笛鯛和金焰笛鯛為研究對(duì)象，對(duì)長(zhǎng)波長(zhǎng)敏感性視蛋白（LWS）和視桿蛋白（RH）進(jìn)行原核載體構(gòu)建和真核表達(dá)，主要結(jié)果如下：1、用特異性引物L(fēng)WSF/R擴(kuò)增出紅鰭笛鯛目的基因LWS全長(zhǎng)，并克隆到pMD-18T中，測(cè)序正確后，定向連接到原核表達(dá)載體pET-32a中，成功構(gòu)建紅鰭笛鯛LWS基因的原核表達(dá)載體并命名為pET-32a-LWS。2、用特異性引物ZLWSF/R擴(kuò)增出兩種笛鯛的LWS基因的開放閱讀框，克隆到p
3、MD-18T中，測(cè)序驗(yàn)證后，定向連接到真核表達(dá)載體pPICZαA中，成功構(gòu)建紅鰭笛鯛LWS基因和金焰笛鯛LWS基因的真核表達(dá)載體并分別命名為pPICZα-LWS-Ler和pPICZα-LWS-Lfu。3、用特異性引物ZRHF/R擴(kuò)增出兩種笛鯛的RH基因開放閱讀框，并克隆到pMD-18T中，測(cè)序正確后，連接到真核的表達(dá)載體pPICZαA中，經(jīng)驗(yàn)證，成功構(gòu)建紅鰭笛鯛RH基因和金焰笛鯛RH基因的真核表達(dá)載體并分別命名為pPICZα-RH-Ler和pPICZα-RH-Lfu。4、將真核表達(dá)載體pPICZα-LWS-Ler、pPICZα-LWS-Lfu、pPICZα-RH-Ler以及pPICZα-RH-
4、Lfu經(jīng)SacⅠ線性化后，電擊轉(zhuǎn)化進(jìn)巴斯德畢赤酵母中，用甲醇30℃誘導(dǎo)，其中成功表達(dá)出目的蛋白紅鰭笛鯛LWS，金焰笛鯛LWS和金焰笛鯛RH，并發(fā)現(xiàn)其最優(yōu)的誘導(dǎo)時(shí)間為12h。而紅鰭笛鯛RH誘導(dǎo)失敗。關(guān)鍵詞：紅鰭笛鯛，金焰笛鯛，視蛋白，原核表達(dá)載體構(gòu)建，真核表達(dá)IHeterogenousexpressionofLutjanuserythropterusandLutjanusfulviflammaopsinsAbstractRedsnapper(Lutjanuserythropterus)andDorysnapper(Lutjanusfulviflamma),belonginggenusLutjan
5、us,whichwerewarmwaternearthebottomofthecaseofoffshorefishspeciesofeconomicvalueforfishinghigherspecies.Opsinsplayacrucialpartinvisualimagingandenvironmentaladaptation.Atpresent,forsnapperfishathomeandabroadresearchfocusedonthebreedingtechnologyandpathologicalresearch,theenvironmentstressandsystemdev
6、elopment.Thereislittleresearchatthevisualproteingenelevel.Inthisstudy,redsnapperandDorysnapperastheresearchobject,usinggeneticengineeringtotwosnapperopsinslongwavelengthsensitiveandRhosopsintobuildProkaryoticexpressionvectorandeukaryoticexpression.Themainresultsareasfollows:1.UsingspecificprimersLWS
7、F/RamplificatoutthetargetgeneLWSofredsnapper,andthansendtotheShanghaiSagonCompany,insurethesequencingwascorrect,doubleenzyme,plasticrecyclingafterthatdirectedintothevectorPET-32a.Aftervalidation,makes
