資源描述：
《鐵過載對骨髓造血微環(huán)境的影響及作用機(jī)制》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、分類號：R551.3學(xué)校代碼：10062密級：學(xué)號：2012602410碩士學(xué)位論文MASTER’SDISSERTATION論文題目：鐵過載對骨髓造血微環(huán)境的影響及作用機(jī)制TITLEEffectandmechanismonbonemarrowmicroenvironmentaffectedbyironoverload一級學(xué)科：臨床醫(yī)學(xué)二級學(xué)科：內(nèi)科學(xué)血液病論文作者：張宇辰指導(dǎo)教師：趙明峰天津醫(yī)科大學(xué)研究生院二〇一五年四月分類號：R551.3學(xué)校代碼：10062密級：學(xué)號：2012602410學(xué)位類別：科學(xué)學(xué)位?專業(yè)學(xué)位?學(xué)科門類：醫(yī)學(xué)碩士學(xué)位論文MASTE
2、R’SDISSERTATION論文題目：鐵過載對骨髓造血微環(huán)境的影響及作用機(jī)制TITLEEffectandmechanismonbonemarrowmicroenvironmentaffectedbyironoverload一級學(xué)科：臨床醫(yī)學(xué)二級學(xué)科：內(nèi)科學(xué)血液病論文作者：張宇辰指導(dǎo)教師：趙明峰導(dǎo)師組成員：李玉明鄧琦天津醫(yī)科大學(xué)研究生院二〇一五年四月學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)下獨(dú)立進(jìn)行研究工作取得的研究成果。除了文中特別加以標(biāo)注引用的內(nèi)容和致謝的地方外，論文中不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，與我一同工
3、作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。學(xué)位論文作者簽名：日期：年月日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解天津醫(yī)科大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，并采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編以供查閱和借閱。同意學(xué)校向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文，并編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫。保密，在年解密后適用本授權(quán)書。本論文屬于不保密√。(請?jiān)谙鄬?yīng)的方框內(nèi)打“√”)學(xué)位論文作者簽名：日期：年月日導(dǎo)師簽名：日期：年月日天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要目的：探討小鼠鐵過載對骨髓造血微環(huán)境
4、的影響及去鐵、抗氧化治療對其損傷的保護(hù)作用。內(nèi)容：通過建立小鼠鐵過載動物模型，研究鐵過載對骨髓造血微環(huán)境的影響及可能機(jī)制，并探討地拉羅司去鐵及NAC抗氧化治療后，對該損傷作用的逆轉(zhuǎn)情況，為臨床治療繼發(fā)性鐵過載提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法：1.通過4Gyγ射線全身照射和(或)右旋糖酐鐵腹腔注射建立正常和骨髓損傷情況下的鐵過載小鼠模型，通過①病理組織切片蘇木精-伊紅染色與普魯士藍(lán)染色的方法分析鐵過載小鼠肝臟、脾臟、骨髓的形態(tài)及鐵沉積情況；②流式細(xì)胞儀檢測骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BM-MSCs)內(nèi)可變鐵池(LIP)水平驗(yàn)證鐵過載模型的成功建立。2.利用倍增時間及CCK8試劑盒檢
5、測BM-MSCs的增殖能力；利用成骨及成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)BM-MSCs向成骨及成脂細(xì)胞分化；采用油紅-o、堿性磷酸酶（ALP）、茜素紅染色檢測BM-MSCs成骨及成脂定向分化能力；利用共培養(yǎng)的方法檢測BM-MSCs的造血支持能力；利用骨髓病理免疫組化檢測骨髓微環(huán)境造血因子的表達(dá)。3.采用2’,7’-二氯熒光黃雙乙酸鹽(DCFH-DA)探針法檢測鐵過載前后小鼠BM-MSCs活性氧(ROS)水平；利用Real-timeRT-PCR方法檢測ROS相關(guān)基因FOXO3、PI3K水平的表達(dá)；成骨相關(guān)基因RUNX2、ALP、OCN，成脂相關(guān)基因PPARg、Adipsin
6、、aP2的表達(dá)；檢測骨髓造血微環(huán)境造血因子VEGF、CXCL12、SCF的表達(dá)。4.經(jīng)地拉羅司(DFX)去鐵或經(jīng)N-乙酰半胱氨酸（NAC）抗氧化治療后，檢測上述指標(biāo)的變化。結(jié)果：1.小鼠肝臟、脾臟、骨髓內(nèi)可見大量鐵沉積，BM-MSCs內(nèi)LIP水平明顯升高，I天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文提示鐵過載模型成功建立；2.鐵過載抑制BM-MSCs的增殖能力，鐵劑組倍增時間（1.74±0.36天）長于對照組(1.03±0.17天)（p<0.05）。鐵過載影響B(tài)M-MSCs的成骨及成脂分化的平衡，鐵過載組成骨細(xì)胞ALP表達(dá)及茜素紅染色減弱，成脂細(xì)胞油紅-O染色增強(qiáng)。3.鐵過
7、載抑制BM-MSCs的造血支持能力，在與骨髓單個核細(xì)胞（BMMNCs）共培養(yǎng)1周后，其支持BMMNCs形成的造血細(xì)胞集落形成單位數(shù)(CFU-E,BFU-E,CFU-GM和CFU-mix)均明顯低于對照組(P<0.05)。4.鐵過載抑制骨髓造血微環(huán)境造血因子VEGF、CXCL12、SCF的表達(dá)，免疫組化及RT-PCR結(jié)果顯示與對照組比較，鐵劑組造血因子VEGF、CXCL12、SCF表達(dá)明顯減弱，經(jīng)去鐵或抗氧化處理后，上述改變部分恢復(fù)(P<0.05)。5.加鐵組BM-MSCs內(nèi)ROS水平明顯高于對照組；且通過檢測ROS相關(guān)的信號通路發(fā)現(xiàn)，加鐵組BM-MSCs的
8、FOXO3表達(dá)減少、PI3K表達(dá)明顯升高(P<0.05)，當(dāng)給予D
