降鈣素基因相關(guān)肽促進(jìn)體外培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化

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1、SOOCHOWUNIVERSITY碩士學(xué)位論文論文題目降鈣素基因相關(guān)肽促進(jìn)體外培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞___________________向神經(jīng)元分化_______________研究生姓名___________________張濤______________指導(dǎo)教師姓名___________________沈憶新______________專業(yè)名稱__________________骨外科學(xué)_____________研究方向_________脊柱外科的基礎(chǔ)與臨床研究論文提交日期2015年3月蘇州大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明.?所提交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下,獨(dú)立進(jìn)行研究工作所

2、取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外,本論文不含其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果,也不含為獲得蘇州大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位證書而使用過(guò)的材料。對(duì)本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體,均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人承擔(dān)本聲明的法律責(zé)任。論文作者簽名蘇州大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人完全了解蘇州大學(xué)關(guān)于收集、保存和使用學(xué)位論文的規(guī)定,即:學(xué)位論文著作權(quán)歸屬蘇州大學(xué)。本學(xué)位論文電子文檔的內(nèi)容和紙質(zhì)論文的內(nèi)容相一致。蘇州大學(xué)有權(quán)向國(guó)家圖書館、中國(guó)社科院文獻(xiàn)信息情報(bào)中心、中國(guó)科學(xué)技術(shù)信息研究所(含萬(wàn)方數(shù)據(jù)電子出版社)、中國(guó)學(xué)術(shù)期刊(光盤版)電子雜志社送交本學(xué)位論文的復(fù)印件和電子文檔,允許

3、論文被查閱和借閱,可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存和匯編學(xué)位論文,可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索。涉密論文口本學(xué)位論文屬在____年_月解密后適用本規(guī)定。非涉密論文口論文作者簽名日期:導(dǎo)師簽名:降鈣素基因相關(guān)肽促進(jìn)體外培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化中文摘要降鈣素基因相關(guān)肽促進(jìn)體外培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化中文摘要目的:探索降鈣素基因相關(guān)肽(Calcitoningene-relatedpeptide,CGRP)對(duì)體外培養(yǎng)的新生小鼠室管膜下區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞增殖和分化的影響。方法:分離新生小鼠室管膜下區(qū)組織,經(jīng)機(jī)械法和酶消化法制成單細(xì)胞懸液,抗SOX-2和抗Nesti

4、n免疫熒光染色,鑒定分離培養(yǎng)的細(xì)胞。以未添加bFGF和EGF的無(wú)血清培養(yǎng)基誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞分化。取體外培養(yǎng)至第3代的神經(jīng)干細(xì)胞,分為4組,分別為對(duì)照組、1nMCGRP組、10nMCGRP組、100nMCGRP組。MTT法尋找體外培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞最佳的增殖時(shí)間,BrdU標(biāo)記法和神經(jīng)球體積測(cè)量法來(lái)檢測(cè)各組之間神經(jīng)干細(xì)胞增殖能力的差異。采用免疫細(xì)胞化學(xué)染色方法來(lái)標(biāo)記神經(jīng)元(NeuronalclassIIIβ‐,tubulinTuj-1)、星形膠質(zhì)細(xì)胞(Glialfibrillaryacidicprotein,GFAP),并分別統(tǒng)計(jì)體外誘導(dǎo)分化培養(yǎng)3天、7天各組之間Tuj-1陽(yáng)性細(xì)胞占總細(xì)胞數(shù)的

5、比例,進(jìn)而比較不同體外培養(yǎng)時(shí)間各組之間神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化的能力的強(qiáng)弱。結(jié)果:MTT法提示體外培養(yǎng)4天神經(jīng)干細(xì)胞增殖能力最強(qiáng)。體外培養(yǎng)4天時(shí),各組之間的BrdU陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)及神經(jīng)球體積無(wú)明顯差異。體外誘導(dǎo)分化3天,對(duì)照組、1nMCGRP組、10nMCGRP組、100nMCGRP組中Tuj-1的百分比分別為(26.1±5.1)%,(28.1±6.1)%,(34.7±4.8)%及(56.0±5)%,其中100nMCGRP組中Tuj-1的百分比相對(duì)于其他3組明顯升高(P<0.05);而體外誘導(dǎo)分化7天,對(duì)照組、1nMCGRP組、10nMCGRP組、100nMCGRP組中Tuj-1的百分比依

6、次為(45.4±4.2)%,(53.8±4.3)%,(70±2.6)%和(48.8±4.1)%,其中10nMCGRP組中Tuj-1的百分比相對(duì)于其他3組明顯升高(P<0.05)。結(jié)論:CGRP無(wú)明顯促進(jìn)體外培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞的增殖作用,但是可以促進(jìn)體外培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化,而且這種促分化作用具有濃度及時(shí)間依賴性。關(guān)鍵詞:降鈣素基因相關(guān)肽;室管膜下區(qū);神經(jīng)干細(xì)胞;增殖;分化。作者:張濤指導(dǎo)教師:沈憶新教授IAbstractCalcitoningene-relatedpeptidestimulatesneuronaldifferentiationofneuralstemcellsi

7、nvitroCalcitoningene-relatedpeptidestimulatesneuronaldifferentiationofneuralstemcellsinvitroAbstractObjiective:Toinvestigatetheeffectsofcalcitoningene-relatedpeptide(CGRP)ontheproliferationandneuronaldifferentiationofneuralstemcel

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