nurr1基因?qū)ι窠?jīng)干細(xì)胞向多巴胺能神經(jīng)元分化的影響

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1、學(xué)術(shù)學(xué)位碩±學(xué)位論文單位代碼；１０６７８分類號(hào)：Ｒ７４２．５學(xué)號(hào)：３５：：２０１２２密級(jí)尾略（Ｉ種Ａ常碩壬學(xué)位論文？Ｎｕｒｒｌ基因?qū)ι窠?jīng)干細(xì)胞向多己胺負(fù)長神經(jīng)元分化的景如向院係一臨床醫(yī)學(xué)院）、所昆明醫(yī)科大學(xué)第研究生姓名沈勇學(xué)科（神經(jīng)外科）、專業(yè)外科學(xué)學(xué)位類型學(xué)術(shù)學(xué)位指導(dǎo)教師宋曉斌教授二〇—五年五月堯巧＆種Ａ常碩±學(xué)位論文Ｎｕｒｒｌ基因?qū)ι窠?jīng)干細(xì)胞向多巴胺能神經(jīng)元分化的影響研巧生姓名沈勇學(xué)科、專業(yè)外科學(xué)（神經(jīng)外科）申請學(xué)位類型學(xué)術(shù)學(xué)位指導(dǎo)教師宋曉斌教授指

2、導(dǎo)小組教師鄧興力副教授湯志偉講師完成日期二〇—五年五月見４６辭滬、常研究生學(xué)位論文研究撰寫聲明本人鄭重聲明：本學(xué)位論文是我本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行學(xué)位課題研究所取得的研究成果。論文中除特別加Ｗ標(biāo)注和致謝的地方外，不包含他人或其他機(jī)構(gòu)己經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研巧成果。對(duì)本研究和論文做過貢獻(xiàn)的同道我均在論文中作了明確的說明并表明謝意一。該學(xué)位論文資料若有不實(shí)之處，本人愿承擔(dān)切相關(guān)責(zé)任。）論文作者（簽名；魏年月茲曰尾巧Ｓ種常研究生學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解昆明醫(yī)科大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，

3、同意學(xué)校保留并向國家有關(guān)部口或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。學(xué)校可公布論文的全部或部分內(nèi)容（確屬保密內(nèi)容已注明，并在解密后遵守此規(guī)定）；學(xué)?？刹捎糜坝　⒖s印或其他手段保存本學(xué)位論文。學(xué)位論文作者（簽名）：指導(dǎo)教師（簽名）：年ｒ月７１曰？￡＾年月１１＾曰Ｊ少本人＂及導(dǎo)師同意將學(xué)位論文提交至清華大學(xué)中國學(xué)術(shù)期刊（光盤版）電子＂ＮＫ雜志社進(jìn)行電子和網(wǎng)絡(luò)出脫并編入ＣＩ系列數(shù)據(jù)庫，傳播本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容，同意按《中國優(yōu)秀博碩±學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫出版章程》規(guī)定享受相關(guān)權(quán)益。■學(xué)位論文作者（簽名）指導(dǎo)教師（簽

4、名）：５＾＾／年丈月ｎ曰＾／Ｊ幸乃；；爵領(lǐng)ｊ目錄中文摘要１Ａｂｓｔｒａｃｔ３本文常用縮咯詞５前胃７材卿方法１０１？材料１０１１１．實(shí)驗(yàn)動(dòng)物０１．２質(zhì)粒載體１０１．３主要儀器１０１４１１．主要試劑１．５主要試劑的配制１２２．方法１４２．１表達(dá)載體的構(gòu)建１４２丄１ＰＣＲ擴(kuò)增目的基因１４２丄２酶切１６２２ＮＳＣ１８．大鼠臟胎ｓ的分離培養(yǎng)及其鑒定２．２．１大鼠胚胎中腦組織的解剖分離１８２１．２．２大鼠胚胎ＮＳＣｓ的分離８２．２．３細(xì)胞計(jì)數(shù)與接種１８

5、２．２．４大鼠胚胎ＮＳＣｓ的培養(yǎng)１８２．２．５大鼠胚胎ＮＳＣｓ的鑒定１９Ｎ２．２．６大鼠巧胎ＳＣｓ的體外誘導(dǎo)分化１９２．３轉(zhuǎn)染及結(jié)果檢測１９２３．．１重姐質(zhì)粒轉(zhuǎn)染ＮＳＣｓ１９２－ｔｍｅ２０．３．２ＲｅａｌｉＰＣＲ鑒定２２．３．３Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ１２．３．４免疫細(xì)胞化學(xué)２２結(jié)果２４ＤＨ－２４１．大鼠重組質(zhì)粒表達(dá)載體ｐＣＮｕｒｒｌ的構(gòu)建－１．１重組質(zhì)粒載體ｐＣＤＨＮｕｒｒｌ的鑒定２４２ＮＳＣ２．ｓ的培養(yǎng)及鑒定８２．１原代培養(yǎng)及傳代２８２．２分化培養(yǎng)２９２．３免疫細(xì)胞化

6、學(xué)染色鑒定３０３．重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染ＮＳＣｓ的效率檢測３０４．Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ３１５ＰＣＲ結(jié)果．實(shí)時(shí)巧光定量３２６．細(xì)胞免疫夷光技術(shù)檢測３４討論３６疑４０參考文獻(xiàn)４１綜述４４攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況５３致謝５４昆明臣科大學(xué)碩±研巧生學(xué)位論文Ｎｕｒｒｌ基因?qū)ι窠?jīng)干細(xì)胞向多田胺能神經(jīng)元分化的巧響碩±研巧生：沈勇導(dǎo)師：宋曉斌教授昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院神經(jīng)外科中文巧要目的：體外觀察Ｎｕｒｒｌ基因過表達(dá)對(duì)ＳＤ大鼠中腦神經(jīng)干細(xì)胞向多己胺能神經(jīng)元分化情況的影響。方法：１．

7、通過全基因合成的方法克隆出大鼠Ｎｕｒｒｌ基因，通過限制性內(nèi)切酶酶切－－－－經(jīng)過轉(zhuǎn)化后連接到質(zhì)粒載體ｐＣＤＨＭＣＳＴ２ＡｃｏｐＧＦＰＭＳＣＶ上，、篩選和鑒定ＣＤＨ－Ｎｕｒｒ等步驟構(gòu)建ｐｌ真核表達(dá)載體。２．取孕１４天ＳＤ胎鼠的中腦組織，分離培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞，在無血清培養(yǎng)基中篩選培養(yǎng)，?。校泊窠?jīng)干細(xì)胞進(jìn)行其歴胎源性及分化潛能的免疫巧光鑒定。３．將培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞分成自然分化組、轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒載體ｐＣＤＨ組、轉(zhuǎn)染－組進(jìn)行試驗(yàn)研巧重組質(zhì)粒載體ＣＤＨＮｕｒｒｌ。應(yīng)用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ、實(shí)時(shí)巧光定量ｐＰＣＲ、免疫英光細(xì)胞化學(xué)的方法檢測