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1、學(xué)校代碼10459學(xué)號(hào)或申請(qǐng)?zhí)?01212443192密級(jí)公開碩士學(xué)位論文MicroRNA126對(duì)人正常肝細(xì)胞葡萄糖代謝的影響作者姓名：何亞非導(dǎo)師姓名：栗夏連教授學(xué)科門類：醫(yī)學(xué)專業(yè)名稱：內(nèi)科學(xué)培養(yǎng)院系：鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院完成時(shí)間：2015年4月AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterEffectofMicroRNA126onGlucoseMetabolismintheNormalLiverCellLinesBy:YafeiHeSupervisor:Prof.XialianLiSpeciality:En
2、docrinologyCollege:ClinicalmedicinedepartmentTheFirstAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversityApril，2015原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研宄所取得的成果。除文中己經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體己經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的科研成果。對(duì)本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者：yf可日期：》0朽年今月對(duì)日學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下完成的論文及相關(guān)的職務(wù)作品，知識(shí)
3、產(chǎn)權(quán)歸屬鄭州大學(xué)。根據(jù)鄭州大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留或向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱；本人授權(quán)鄭州大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或者其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文。本人離校后發(fā)表、使用學(xué)位論文或與該學(xué)位論文直接相關(guān)的學(xué)術(shù)論文或成果時(shí)，第一署名單位仍然為鄭州大學(xué)。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定。學(xué)位論文作者：^日期：2#年$月對(duì)日摘要MicroRNA126對(duì)人正常肝細(xì)胞葡萄糖代謝的影響研究生何亞非導(dǎo)師栗夏連教授鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院內(nèi)分泌科中國(guó)鄭州450052摘要背景：糖尿病是
4、一種復(fù)雜的代謝紊亂性疾病，血糖代謝紊亂是其主要特征。研究表明，葡萄糖的代謝紊亂可能與高血糖代謝記憶、炎癥反應(yīng)以及線粒體功能異常有關(guān)，但有關(guān)糖尿病的具體發(fā)病機(jī)制，到目前仍不明確。MicroRNAs（miRNAs）是一類序列短小的、進(jìn)化上高度保守的、非編碼的RNA，由20-25個(gè)單核苷酸組成。miRNAs通過(guò)與靶基因3’非編碼區(qū)結(jié)合，導(dǎo)致mRNA降解或直接抑制mRNA的翻譯，對(duì)基因轉(zhuǎn)錄后進(jìn)行調(diào)控，從而參與許多生理病理過(guò)程的精細(xì)調(diào)節(jié)。研究發(fā)現(xiàn)，miRNAs在細(xì)胞增殖和凋亡、炎癥反應(yīng)、信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞代謝以及腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起到至關(guān)重要的作用。大量的[1]實(shí)驗(yàn)證據(jù)表明，miRNAs
5、在維持機(jī)體葡萄糖的穩(wěn)態(tài)和糖尿病的發(fā)展中有重要的調(diào)節(jié)作用。AnnaZampetaki等人發(fā)現(xiàn)在糖尿病患者的血漿中microRNA126（miR-126）的相對(duì)表達(dá)量明顯降低，提出miR-126能準(zhǔn)確鑒別糖尿病高危者和健康人，可以作為糖尿病疾病發(fā)展的標(biāo)志物。同時(shí)，我課題組在前期研究發(fā)現(xiàn)，miR-126在1型和2型糖尿病患者血漿中水平降低，其表達(dá)水平與炎癥反應(yīng)以及脂代謝紊亂等多種糖尿病危險(xiǎn)因素相關(guān)。肝臟是人體主要的葡萄糖代謝場(chǎng)所，在糖尿病的發(fā)生發(fā)展中起著至關(guān)重要的作用。miR-126對(duì)人正常肝細(xì)胞葡萄糖代謝的具體作用如何呢？本研究針對(duì)改變changliver細(xì)胞miR-126的表達(dá)
6、量，以探討miR-126表達(dá)水平改變時(shí)對(duì)細(xì)胞胰島素反應(yīng)的敏感性和葡萄糖代謝的影響，以進(jìn)一步了解糖尿病的發(fā)病機(jī)理。IV摘要材料和方法：1．Changliver細(xì)胞分為3組，正常對(duì)照組、negativecontrolFAM（NC-FAM）組、microRNAinhibitorNC-FAM（IN-NC-FAM）組，分別用不同濃度10、20、40、80nM在lipofectamine2000（Lip2000)作用下轉(zhuǎn)染細(xì)胞，確定最佳轉(zhuǎn)染條件。2．將changliver細(xì)胞分為6組，分別為microRNA126mimic(miR-126)組、negativecontrol（NC）組、m
7、icroRNA126inhibitor(In-miR-126)組、microRNAinhibitornegativecontrol（In-NC）組、lipofectamine2000（Lip2000）組和正常細(xì)胞對(duì)照組，按照上述優(yōu)化的轉(zhuǎn)染條件將對(duì)應(yīng)的人工合成的核苷酸序列轉(zhuǎn)染入相應(yīng)的細(xì)胞組。3．實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶聯(lián)反應(yīng)（qRT-PCR）檢測(cè)各組細(xì)胞miR-126表達(dá)水平。4．將步驟2中各組細(xì)胞轉(zhuǎn)染后培養(yǎng)48h，用人工合成胰島素（100nM）刺激12小時(shí)，用GOD-POD法測(cè)上清葡萄糖濃度，BCA法測(cè)板下層
