microrna-126對(duì)人肝細(xì)胞糖代謝影響的機(jī)制研究

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1、學(xué)校代碼10459學(xué)號(hào)或申請(qǐng)?zhí)?01212443193密級(jí)公開(kāi)碩士學(xué)位論文MicroRNA-126對(duì)人肝細(xì)胞糖代謝影響的機(jī)制研究作者姓名：胡志為導(dǎo)師姓名：栗夏蓮教授學(xué)科門(mén)類(lèi)：醫(yī)學(xué)專(zhuān)業(yè)名稱(chēng)：內(nèi)科學(xué)（內(nèi)分泌學(xué)）培養(yǎng)院系：鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院完成時(shí)間：2015年5月AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterEffectsofMicroRNA-126onGlucoseMetabolisminHumanLiverCellsByZhiweiHuSupervisor:XialianLiDepartmen

2、tofEndocrinologyandMetabolismTheFirstAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversityMay,2015原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的成果。除文中己經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的科研成果。對(duì)本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均己在文中以明確方式標(biāo)明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者：?秘日期：㈧丨土年月巧日學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下完成的論文及相關(guān)的職務(wù)作品，知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬鄭州大學(xué)。根據(jù)鄭

3、州大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留或向國(guó)家有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱；本人授權(quán)鄭州大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以釆用影印、縮印或者其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文。本人離校后發(fā)表、使用學(xué)位論文或與該學(xué)位論文直接相關(guān)的學(xué)術(shù)論文或成果時(shí)，第一署名單位仍然為鄭州大學(xué)。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定。學(xué)位論文作者：〒F1期??>士年月％曰摘要MicroRNA-126對(duì)人肝細(xì)胞糖代謝影響的機(jī)制研究研究生胡志為導(dǎo)師栗夏蓮鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院內(nèi)分泌科河南鄭州450052摘要背景隨著生活節(jié)奏的加快

4、，生活水平的提高，在人們的生活方式發(fā)生巨大變化的同時(shí)，代謝性疾病的發(fā)病率也在全世界范圍內(nèi)逐年攀升，其中糖尿病是代謝性疾病中最常見(jiàn)的一種。在2型糖尿病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，肝臟、肌肉、脂肪等組織對(duì)胰島素反應(yīng)能力下降甚至抵抗胰島素的作用，繼而會(huì)引起一些如肥胖、多囊卵巢綜合癥、高脂血癥及動(dòng)脈粥樣硬化等疾病。肝臟是糖代謝的重要器官，胰島素主要通過(guò)胰島素受體底物（IRS）/磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K)/蛋白激酶B（Akt）信號(hào)傳導(dǎo)通路影響肝臟的糖代謝，然而肝臟胰島素抵抗的發(fā)病機(jī)制，目前仍不明確。MicroRNAs（miRNAs）是一類(lèi)短小的、非編碼的微小RNAs，對(duì)維持機(jī)

5、體自身穩(wěn)態(tài)的平衡、疾病的產(chǎn)生和發(fā)展過(guò)程中有著重要影響，它們與靶信使RNA(mRNA)的3’非翻譯區(qū)(3’-UTRs)結(jié)合，抑制編碼蛋白基因的轉(zhuǎn)錄后表達(dá)。MicroRNA-126不僅在內(nèi)皮細(xì)胞中含量豐富，在凋亡小體中的表達(dá)也很高，國(guó)內(nèi)外的研究發(fā)現(xiàn)，在糖尿病動(dòng)物模型以及在糖尿病患者的血漿中，MicroRNA-126的表達(dá)量明顯降低，因此我們認(rèn)為MicroRNA-126可能與糖尿病的發(fā)生與發(fā)展有聯(lián)系。Regazzi等人提出MicroRNAs不僅可以作為早期疾病發(fā)生的標(biāo)志物，而且還可以是細(xì)胞間傳遞信息的信使，導(dǎo)致疾病進(jìn)展的原因，本實(shí)驗(yàn)將對(duì)MicroRNA-126對(duì)肝細(xì)

6、胞糖代謝影響的機(jī)制進(jìn)行研究。I摘要目的本研究通過(guò)對(duì)來(lái)源于肝臟的永生非腫瘤細(xì)胞系——張氏肝細(xì)胞轉(zhuǎn)染MicroRNA-126類(lèi)似物、抑制物及其陰性對(duì)照序列，改變細(xì)胞內(nèi)MicroRNA-126的表達(dá)量，并測(cè)定轉(zhuǎn)染后細(xì)胞內(nèi)胰島素信號(hào)傳導(dǎo)通路中相關(guān)蛋白（IRS-1、PIK3R2、Akt-2、p-Akt-2）的表達(dá)水平，旨在探討MicroRNA-126對(duì)人肝細(xì)胞糖代謝功能影響的機(jī)制。材料和方法1．用含有10%胎牛血清、1%青鏈霉素的培養(yǎng)基培養(yǎng)張氏肝細(xì)胞（Changlivercell），置于37℃、5%CO2飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。2.熒光顯微鏡下確定細(xì)胞的最佳轉(zhuǎn)染條件：取

7、對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的張氏肝細(xì)胞以55×10/孔接種于24孔板中，細(xì)胞密度生長(zhǎng)至70%時(shí)，用脂質(zhì)體Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染不同濃度（20nmol/L、40nmol/L、80nmol/L）的熒光標(biāo)記的陰性對(duì)照序列（FAM-NC及inhibitorFAM-NC），6小時(shí)后在熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞中綠色熒光強(qiáng)度，確定細(xì)胞最佳轉(zhuǎn)染濃度。3．將研究對(duì)象分為6組：MicroRNA-126類(lèi)似物組、MicroRNA-126抑制物組、MicroRNA-126類(lèi)似物陰性對(duì)照組、MicroRNA-126抑制物陰性對(duì)照組、轉(zhuǎn)染試劑組和正常對(duì)照組。用脂質(zhì)體Lipofectamine

8、2000將人工合成核苷酸序列（Micr