prl、gc對(duì)奶牛脂肪細(xì)胞和肝細(xì)胞脂代謝的影響

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1、PRL、GC對(duì)奶牛脂肪細(xì)胞及肝細(xì)胞脂代謝的影響EffectsofPRLandGConlipidmetabolisminadipocytesandhepatocytesofdairycows作者姓名：殷立恒專業(yè)名稱：臨床獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：劉國文教授學(xué)位類別：農(nóng)學(xué)碩士論文答辯日期：2015年06月05日中文摘要PRL、GC對(duì)奶牛脂肪細(xì)胞及肝細(xì)胞脂代謝的影響乳脂是牛奶中重要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，它的合成受到機(jī)體營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)和神經(jīng)內(nèi)分泌激素信號(hào)等一系列因素的調(diào)控。脂肪組織和肝臟是奶牛機(jī)體兩大脂代謝器官，對(duì)于維持機(jī)體能量平衡和脂質(zhì)穩(wěn)態(tài)起著重要作用。催乳素（prolact

2、in，PRL）是促進(jìn)乳腺發(fā)育和啟動(dòng)泌乳的重要激素，研究發(fā)現(xiàn)在泌乳期PRL能夠發(fā)揮“能量遷移”作用，將營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)優(yōu)先供給乳腺，用于乳脂和乳蛋白的合成，糖皮質(zhì)激素（glucocorticoid，GC）是下丘腦-垂體-腎上腺軸（hypothalamic–pituitary–adrenalaxis，HPA）上的重要激素，在機(jī)體內(nèi)糖、脂肪和蛋白質(zhì)的代謝中發(fā)揮調(diào)控作用，因此探究PRL和GC對(duì)脂肪組織和肝臟脂代謝的影響對(duì)于掌握乳脂合成調(diào)節(jié)機(jī)制具有重要的意義。本研究通過體外分離培養(yǎng)奶牛前脂肪細(xì)胞，然后誘導(dǎo)分化為成熟脂肪細(xì)胞，并對(duì)細(xì)胞做初步鑒定，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞分化過程中

3、脂滴逐漸增加、甘油三酯（Triglyceride，TG）含量逐漸升高，大約在誘導(dǎo)13天后細(xì)胞內(nèi)脂滴和TG含量維持相對(duì)恒定，脂肪細(xì)胞內(nèi)脂合成相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子過氧化物酶體增殖物激活受體γ2(peroxisomeproliferator-activatedreceptorγ2,PPARγ2)和固醇調(diào)節(jié)原件結(jié)合蛋白(sterolregulatoryelementbindingprotein1c,SREBP-1c)的表達(dá)水平也隨著細(xì)胞的分化而升高，mRNA水平在分化第4天達(dá)到峰值，隨后開始降低，而蛋白表達(dá)水平和核分布量在分化第13天顯著高于分化0天；然后向分

4、化成熟的脂肪細(xì)胞中添加PRL，探究PRL對(duì)脂肪細(xì)胞脂代謝的作用，結(jié)果顯示，PRL在催乳素受體（prolactinreceptors，PRLR）介導(dǎo)下激活Janus激酶-信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激活子（Januskinase2-transcriptionfactorsignaltransducerandactivatoroftranscription5，JAK2/STAT5)通路，使STAT5磷酸化增加，從而抑制脂肪細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子SREBP-1c的表達(dá)和入核，然后進(jìn)一步使下游脂合成相關(guān)基因的表達(dá)水平降低，而脂分解相關(guān)基因的表達(dá)水平升高，最終使脂肪細(xì)胞培養(yǎng)

5、液中甘油含量升高，說明PRL能夠促進(jìn)脂肪動(dòng)員。I為了探究GC對(duì)奶牛脂肪細(xì)胞和肝細(xì)胞脂代謝的作用，本研究通過向體外培養(yǎng)的奶牛脂肪細(xì)胞和肝細(xì)胞中添加地塞米松（dexamethasone，DXM），利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR），蛋白印記（Westernblotting），免疫熒光（IF），酶聯(lián)免疫法（Elisa）等分子生物學(xué)手段檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)相關(guān)通路上關(guān)鍵蛋白及下游脂代謝相關(guān)基因的表達(dá)水平，結(jié)果顯示，DXM在奶牛脂肪細(xì)胞和肝細(xì)胞中均發(fā)揮促進(jìn)脂合成的作用，在脂肪細(xì)胞中，DXM主要通過上調(diào)細(xì)胞糖皮質(zhì)激素受體（glucocorticoidrecep

6、tors，GR）的表達(dá)水平激活核轉(zhuǎn)錄因子SREBP-1c，從而使下游脂合成相關(guān)基因的表達(dá)水平升高，脂分解相關(guān)基因的表達(dá)水平降低，最終導(dǎo)致脂肪細(xì)胞培養(yǎng)液中甘油含量降低；在肝細(xì)胞中，DXM主要通過上調(diào)細(xì)胞GR的表達(dá)水平激活核轉(zhuǎn)錄因子SREBP-1c、碳水化合物反應(yīng)元件結(jié)合蛋白（Carbohydratesresponseelementbindingprotein,ChRBP）和過氧化物酶體增殖物激活受體α(peroxisomeproliferator-activatedreceptorα,PPARα)，促進(jìn)它們的表達(dá)和入核，從而使下游脂合成相關(guān)基因的

7、表達(dá)水平升高，脂氧化相關(guān)基因的表達(dá)水平降低，最終使肝細(xì)胞中TG含量升高，DXM作用下肝細(xì)胞中載脂蛋白的表達(dá)水平也升高，從而使肝細(xì)胞培養(yǎng)液中極低密度脂蛋白（verylowdensitylipoprotein,VLDL）含量升高，以上結(jié)果明DXM能夠促進(jìn)肝細(xì)胞脂合成，增加肝細(xì)胞中TG的含量，并促進(jìn)肝臟VLDL的組裝和分泌。關(guān)鍵詞：脂代謝；肝細(xì)胞；脂肪細(xì)胞；催乳素；糖皮質(zhì)激素IIAbstractEffectsofPRLandGConlipidmetabolisminadipocytesandhepatocytesofdairycowsMilkfati

8、sanimportantnutrientcompositioninmilk.Thesynthesisofmilkfatisregulatedbynut