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《小型豬成體心肌干細(xì)胞的體外培養(yǎng)及鑒定》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、分類號(hào)：R541.4學(xué)校代碼：10062密級(jí)：學(xué)號(hào)：2012602428碩士學(xué)位論文MASTER’SDISSERTATION論文題目：小型豬成體心肌干細(xì)胞的體外培養(yǎng)及鑒定TITLE:InVitroCultureandIdentificationofCardiacStemCellsfromAdultMini-pigs一級(jí)學(xué)科：臨床醫(yī)學(xué)二級(jí)學(xué)科：內(nèi)科學(xué)心血管病論文作者：李彬指導(dǎo)教師：盧成志教授天津醫(yī)科大學(xué)研究生院二〇一五年五月分類號(hào)：R541.4學(xué)校代碼：10062密級(jí)：學(xué)號(hào)：2012602428學(xué)位類別：科學(xué)學(xué)位?專業(yè)學(xué)位□√學(xué)科門類：醫(yī)學(xué)碩士學(xué)位論文MASTER’
2、SDISSERTATION論文題目：小型豬成體心肌干細(xì)胞的體外培養(yǎng)及鑒定TITLE:InVitroCultureandIdentificationofCardiacStemCellsfromAdultMini-pigs一級(jí)學(xué)科：臨床醫(yī)學(xué)二級(jí)學(xué)科：內(nèi)科學(xué)心血管病論文作者：李彬指導(dǎo)教師：盧成志教授導(dǎo)師組成員：陳欣夏大勝天津醫(yī)科大學(xué)研究生院二〇一五年五月學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下獨(dú)立進(jìn)行研究工作取得的研究成果。除了文中特別加以標(biāo)注引用的內(nèi)容和致謝的地方外，論文中不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，與我一同工作的同志對(duì)
3、本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。學(xué)位論文作者簽名：日期：年月日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解天津醫(yī)科大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，并采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編以供查閱和借閱。同意學(xué)校向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文，并編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)。保密，在年解密后適用本授權(quán)書。本論文屬于不保密□√。學(xué)位論文作者簽名：日期：年月日導(dǎo)師簽名：日期：年月日天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要目的：心肌干細(xì)胞再生療法是心肌梗死的新型治療方法，但是心肌干細(xì)胞數(shù)量少，擴(kuò)增難度大
4、，其體外培養(yǎng)方法并沒有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，國(guó)內(nèi)許多實(shí)驗(yàn)室獲得的心肌干細(xì)胞未能實(shí)現(xiàn)其多向分化潛能的鑒定，從而尚不能作為心肌干細(xì)胞的有力佐證。本研究旨在探討一種高效、穩(wěn)定的小型豬心肌干細(xì)胞體外培養(yǎng)方法，并且對(duì)其進(jìn)行全面系統(tǒng)的鑒定，為心肌梗死的細(xì)胞生物療法奠定基礎(chǔ)。方法：選取成年巴馬小型豬，雌性，體重25-30kg。通過心臟外科手術(shù)經(jīng)右側(cè)第二肋間做小切口鉗取右心耳組織，用組織塊培養(yǎng)法獲取原代心肌干細(xì)胞，以心肌干細(xì)胞培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)，視細(xì)胞生長(zhǎng)情況進(jìn)行傳代。選取分選純化后的第3代細(xì)胞行流式檢測(cè)鑒定細(xì)胞表型：c-kit、CD34、CD45、CD31、CD90、Lineage；行Wes
5、ternBlot檢測(cè)心肌早期特異性轉(zhuǎn)錄因子Nkx2.5和GATA-4的表達(dá)；經(jīng)誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)后行免疫熒光檢測(cè)CX43、cTnT、α-SMA、vWF的表達(dá)以觀察心肌干細(xì)胞的多向分化潛能。結(jié)果：1.從成年小型豬右心耳組織中分離的原代細(xì)胞于倒置顯微鏡下觀察呈“小、圓、亮”的特征，生長(zhǎng)緩慢，傳代后細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，形態(tài)逐漸變成梭形，較原代易于生長(zhǎng)。2.純化后細(xì)胞經(jīng)流式細(xì)胞儀鑒定細(xì)胞表型為c-kit+CD34-CD45-CD31-CD90-Lineage-。3.WesternBlot檢測(cè)結(jié)果示心肌早期特異性轉(zhuǎn)錄因子Nkx2.5和GATA-4表達(dá)陽性。4.純化后細(xì)胞經(jīng)不同誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)培
6、養(yǎng)后，能夠表達(dá)：心肌細(xì)胞特異性蛋白CX43和cTnT，平滑肌細(xì)胞特異性蛋白α-SMA，以及內(nèi)皮細(xì)胞特異性蛋白vWF。結(jié)論：1.自成年小型豬右心耳組織成功分離獲得細(xì)胞表型為c-kit+CD34-CD45-CD31-CD90-Lineage-的細(xì)胞，陽性表達(dá)干細(xì)胞表面標(biāo)記物。I天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文2.本研究獲得的細(xì)胞能夠表達(dá)心肌早期特異性轉(zhuǎn)錄因子Nkx2.5和GATA-4，提示該細(xì)胞具備調(diào)控自身向心肌細(xì)胞早期分化的能力。3.經(jīng)誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)培養(yǎng)后細(xì)胞能夠表達(dá)CX43、cTnT、α-SMA、vWF等特異性標(biāo)記蛋白，提示該細(xì)胞具有向心肌細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞等多方向分
7、化的潛能。4.本研究自原代組織塊中分離、培養(yǎng)、純化所得細(xì)胞經(jīng)流式細(xì)胞儀、WesternBlot測(cè)定、多向分化潛能檢驗(yàn)等過程鑒定為心肌干細(xì)胞。本研究探索出一種高效、統(tǒng)一的小型豬心肌干細(xì)胞體外培養(yǎng)及鑒定方法，對(duì)于臨床治療具有指導(dǎo)意義。關(guān)鍵詞：心肌干細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞擴(kuò)增流式細(xì)胞儀分化II天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文AbstractObjectives:Cardiacstemcellregenerativetherapyisanewtreatmentofmyocardialinfarction.However,thereisnouniforminvitroculturesta
8、ndard
