渝產(chǎn)續(xù)斷多糖超聲波輔助提取工藝優(yōu)化

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1、渝產(chǎn)續(xù)斷多糖超聲波輔助提取工藝的優(yōu)化-農(nóng)學(xué)論文渝產(chǎn)續(xù)斷多糖超聲波輔助提取工藝的優(yōu)化張丹１，陶燕鐸２，談利紅１，余保１，顏學(xué)偉１，曹緯國(guó)１（１．重慶醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院，重慶４０００１６；２．中國(guó)科學(xué)院西北高原生物研究所，西寧８１００００）摘要：為建立渝產(chǎn)續(xù)斷（Ｄｉｐｓａｃｕｓａｓｐｅｒｏｉｄｓ）多糖的最佳超聲波輔助提取工藝，設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)，以續(xù)斷多糖的提取率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)續(xù)斷多糖的超聲波輔助提取工藝參數(shù)進(jìn)行考察。結(jié)果表明，最佳超聲波輔助提取工藝為料液比１∶２０（ｇ∶ｍＬ），提取時(shí)間60min，提取４次，測(cè)得續(xù)斷多糖的平均提取率為７．４７２％，ＲＳＤ為２．１２％，表明續(xù)斷多

2、糖超聲波輔助提取工藝穩(wěn)定，質(zhì)量可控。關(guān)鍵詞：續(xù)斷（Ｄｉｐｓａｃｕｓａｓｐｅｒｏｉｄｓ）；多糖；正交試驗(yàn)；超聲波輔助中圖分類號(hào)：Ｓ５６７．２３＋９；Ｒ２８４．２文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Ａ文章編號(hào)：０４３９－８１１４（２０１５）０２－０431－０３ＤＯＩ：１０．１４０８８／ｊ．ｃｎｋｉ．ｉｓｓｎ０４３９－８１１４．２０１５．０２．０44續(xù)斷為川續(xù)斷科植物川續(xù)斷（Ｄｉｐｓａｃｕｓ7/7ａｓｐｅｒｏｉｄｓ）的干燥根［１］，又名川斷，具有補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨、續(xù)折傷、止崩漏、安胎等功效，主要用于胎漏、胎動(dòng)不安、滑胎、腰膝酸軟、跌打損傷和骨折等癥。續(xù)斷化學(xué)成分研究已較為深入，且多集中于其皂苷類成分

3、［２，３］，已有研究表明續(xù)斷類藥材多糖含量較高，重慶作為續(xù)斷的主產(chǎn)區(qū)之一，目前尚未有關(guān)于重慶產(chǎn)續(xù)斷多糖的研究報(bào)道。多糖尤其是中藥多糖具有增強(qiáng)機(jī)體免疫功能及抗腫瘤等藥理作用，因此續(xù)斷藥材中含量較高的多糖類成分具有潛在的研究?jī)r(jià)值。本試驗(yàn)以重慶產(chǎn)續(xù)斷為原料，采用正交試驗(yàn)法優(yōu)選續(xù)斷多糖的超聲波輔助提取工藝，為續(xù)斷多糖的深入研究奠定基礎(chǔ)。１材料與方法１．１材料與儀器續(xù)斷藥材采自重慶武隆后坪鄉(xiāng)，經(jīng)重慶醫(yī)科大學(xué)王剛副教授鑒定為川續(xù)斷。ＵＶ－１７５０型紫外可見分光光度計(jì)（島津儀器有限公司）；ＨＨ－６型數(shù)顯恒溫水浴鍋（金壇市榮華儀器制造有限公司）；ＡＬ２０４型電子分析天平（瑞士梅特勒托

4、利多集團(tuán)）；ＫＨ５２００ＤＡ型數(shù)控超聲波清洗器（昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司），ＤＧＧ－９２４０Ａ型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司）。葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)藥品生物制品檢定研究院提供，批號(hào)為１１０８３３），濃硫酸、正丁醇、氯仿、丙酮、無水乙醇、９５％乙醇、石油醚、純凈水等均為分析純。１．２試驗(yàn)方法１．２．１標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制室溫下精密稱取干燥至恒重的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品５１．８ｍｇ，置５０ｍＬ容量瓶中，加水溶解并定容至刻度，搖勻即得。１．２．２供試品溶液的制備稱取已烘干的續(xù)斷藥材粉末１０ｇ，置圓底燒瓶中加入８０ｍＬ石油醚回流提取脫脂，共計(jì)２次，每次２ｈ。藥渣揮去溶劑后，加

5、入８０ｍＬ９５％乙醇回流提?。泊?，每次１．５ｈ，藥渣揮去溶劑后，加水２００ｍＬ，１００℃水浴提?。荡危看危?/7ｈ，合并提取液，濃縮并定容至１０００ｍＬ，即得供試品溶液。１．２．３標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備吸取上述標(biāo)準(zhǔn)品溶液０、０．５、１．０、２．０、４．０、５．０ｍＬ于５０ｍＬ容量瓶中，加去離子水稀釋至刻度，得系列葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液。各吸?。埃担恚讨糜冢保埃恚叹呷嚬苤?，再分別加入５％苯酚１．０ｍＬ，搖勻后迅速加入濃硫酸４．０ｍＬ，搖勻后３０℃水?。常埃恚椋睿±鋮s１５ｍｉｎ，在４８９ｎｍ下測(cè)定其吸光度，以吸光度Ａ為縱坐標(biāo)，葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品濃度Ｃ為橫坐標(biāo)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線［４，５］

6、。１．２．４正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)［６，７］選定影響多糖提取率的料液比（ｇ∶ｍＬ，下同）、提取時(shí)間以及提取次數(shù)作為考察因素，以多糖提取率作為考察指標(biāo)，選用Ｌ９（３４）正交表安排試驗(yàn)考察各因素的影響，因素與水平見表１。２結(jié)果與分析２．１最大吸收波長(zhǎng)的確定精密量取供試品溶液與標(biāo)準(zhǔn)品溶液各０．０５ｍＬ，置５ｍＬ容量瓶中，分別加１．０ｍＬ去離子水、４％苯酚溶液１．０ｍＬ，搖勻，加入濃硫酸５．０ｍＬ，４０℃水浴加熱１５ｍｉｎ，置冰水浴中冷卻５ｍｉｎ，以相應(yīng)的試劑為空白，同時(shí)制備供試品與標(biāo)準(zhǔn)品的未顯色樣品，按照紫外可見分光光度法，在２００～８００ｎｍ范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描，續(xù)斷多糖與葡萄糖樣品

7、顯色后均在４８９ｎｍ處有最大吸收，且對(duì)應(yīng)未顯色樣品在４８９7/7ｎｍ處基本沒有吸收，結(jié)果見圖１。因此選擇４８９ｎｍ為測(cè)定波長(zhǎng)。２．２標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密吸取上述標(biāo)準(zhǔn)品溶液０、０．５、１．０、２．０、４．０、５．０ｍＬ于５０ｍＬ容量瓶中，加去離子水稀釋至刻度，得系列葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液。以吸光度Ａ為縱坐標(biāo)，葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品濃度Ｃ為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線為：Ａ＝７．８７Ｃ＋０．００４３６，ｒ＝０．９９９３，結(jié)果表明，葡萄糖濃度在０．０１０３６～０．１０３６０ｍｇ／ｍＬ范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。２．３正交試驗(yàn)結(jié)果以續(xù)斷多糖的提取率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，篩選續(xù)斷多糖的超聲波