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《實(shí)驗(yàn)五總糖的測(cè)定》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。
1、實(shí)驗(yàn)五、總糖和還原糖的測(cè)定費(fèi)林試劑比色法一、實(shí)驗(yàn)意義掌握還原糖和總糖的測(cè)定原理，學(xué)習(xí)用直接滴定法測(cè)定還原糖的方法。二、實(shí)驗(yàn)原理將一定量的堿性酒石酸銅甲液和乙液等體積混合時(shí)，硫酸銅與氫氧化鈉反應(yīng)，生成氫氧化銅沉淀：2NaOH+CuSO4=Cu(OH)2；+Na2SO4所牛成的氫氧化銅沉淀與酒石酸鈉反應(yīng)，牛成可溶性的酒石酸鉀鈉銅：COOKCOOKh-c—ohH-C—0Cu(OHL+1=1/Cu+2H20?h-c-ohH-f-0COONaCOONa在加熱條件下，用樣液滴定，樣液中的還原糖與酒石酸鉀鈉銅反應(yīng)，酒石酸鉀鈉銅被述原糖述原
2、，產(chǎn)生紅色氧化亞銅沉淀，還原糖則被氧化和降解，其反應(yīng)如下：COOK1CHOCOOK1COOHH—C—OH、1H—C—OH161H-C-OHCu+(CHOH)4+6H2O/1=6IH-C-OH+(CHOH)3+Cu2Oh2co31COONaCH.OH-1COONaCOOH反應(yīng)生成的氧化亞銅沉淀與費(fèi)林試劑中的亞鐵氟化鉀(黃血鹽)反應(yīng)生成可溶性復(fù)鹽，便于觀察滴定終點(diǎn)。Cu2O+K4Fe(CN)6+H20^K2Cu2Fe(CN)6+2K0H(氧化亞銅)(淡黃色)滴定時(shí)以亞甲基藍(lán)為氧化一述原指示劑。因?yàn)閬喖谆{(lán)氧化能力比二價(jià)銅弱，待二
3、價(jià)銅離子全部被還原后，稍過(guò)量的還原糖可使藍(lán)色的氧化型亞甲基藍(lán)還原為無(wú)色的還原型的亞甲基藍(lán)，即達(dá)滴定終點(diǎn)。根據(jù)樣液量可計(jì)算出還原糖含量。三、試劑和器材1、試劑①堿性酒石酸銅甲液：稱(chēng)取15g硫酸銅(CuSO45H2O)及0.05g亞甲基藍(lán)，溶于蒸憎水中并稀釋到lOOOmL②堿性酒石酸銅乙液：稱(chēng)取50g酒石酸鉀鈉及75gNaOH,溶于蒸憾水中，再加入4g亞鐵氧化鉀［iCiFe(CN)6〕，完全溶解后，用蒸憾水稀釋到1000ml,貯存于具橡皮塞玻璃瓶中。③0.1%葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱(chēng)取l.OOOg經(jīng)98?100°C干燥至恒重的無(wú)水
4、葡萄糖，加蒸憎水溶解后移入1000ml容量瓶中，加入5ml濃HC1(防止微生物生長(zhǎng))，用蒸丫留水稀釋到1000mlo④6mol/LHCl：取250ml濃HC1(35%?38%)用蒸丫留水稀釋到500ml。⑤碘一碘化鉀溶液：稱(chēng)取5g碘，10g碘化鉀溶于100ml蒸館水中。⑥6NNaOH：稱(chēng)取120gNaOH溶于500ml蒸憾水中。⑦0.1%酚駄指示劑。2、材料山芋粉3、器材屯熱恒溫水浴鍋，調(diào)溫電爐，250ml錐形瓶，滴定管。四、實(shí)驗(yàn)操作1、樣品中述原糖的提取準(zhǔn)確稱(chēng)取2g山芋粉，放在100ml燒杯中，先以少量蒸館水調(diào)成糊狀，然后
5、加入50ml蒸憾水，混勻，于50°C恒溫水浴屮保溫20min,不時(shí)攪拌，使還原糖浸出混。過(guò)濾，將濾液全部收集在100ml的容量瓶中，用蒸憾水定容至刻度，即為還原糖提取液。2、樣品中總糖的水解及提取準(zhǔn)確稱(chēng)取lg山芋粉，放在錐形瓶中，加入6mol/LHCl10ml,蒸館水15ml,在沸水浴屮加熱0.5h,取出1?2滴置于白瓷板上，加1滴I?KI溶液檢查水解是否完全。如已水解完全，則不呈現(xiàn)藍(lán)色。水解畢。冷卻至室溫后加入1滴酚駄指示劑，以6NNaOH溶液中和至溶液呈微紅色，并定容到100ml,過(guò)濾取濾液10ml于100ml容量瓶中，
6、定容至刻度，混勻，即為稀釋1000倍的總糖水解液，用于總糖測(cè)定。3、堿性酒石酸銅溶液的標(biāo)定準(zhǔn)確吸取堿性灑石酸銅甲液和乙液各5.00ml,置于250ml錐形瓶中，加蒸憾水10ml,加玻璃珠3粒。從滴定管滴加約9ml葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，加熱使其在2min內(nèi)沸騰，準(zhǔn)確沸騰30s,趁熱以每2s1滴的速度繼續(xù)滴加葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，直至溶液藍(lán)色剛好褪去為終點(diǎn)。記錄消耗葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的總體積。平行操作3次，取其平均值，按下式計(jì)算：F=CXV式中：F—10ml堿性酒石酸銅溶液相當(dāng)于葡萄糖的量，mg；C—葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，mg/ml；V—標(biāo)定時(shí)
7、消耗葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的總體積，mlo4、樣品糖的定量測(cè)定(1)樣晶溶液預(yù)測(cè)定：吸取堿性酒石酸銅甲液及乙液各5.00ml,置于250ml錐形瓶中，加蒸館水10ml,加玻璃珠3粒，加熱使其在2min內(nèi)沸騰,準(zhǔn)確沸騰30s,趁熱以先快后慢的速度從滴定管中滴加樣品溶液，滴定時(shí)要保持溶液呈沸騰狀態(tài)。待溶液由藍(lán)色變淺時(shí)，以每2sl滴的速度滴定，直至溶液的藍(lán)色剛好褪去為終點(diǎn)。記錄樣品溶液消耗的體積。(2)樣晶溶液測(cè)定：吸取堿性酒石酸銅甲液及乙液各5.00ml,置于錐形瓶中，加蒸餡水10ml,加玻璃珠3粒，從滴定管中加入比與測(cè)試樣品溶液消耗的
8、總體積少1ml的樣品溶液，加熱使其在2min內(nèi)沸騰，準(zhǔn)確沸騰30s,趁熱以每2s1滴的速度繼續(xù)滴加樣液，直至藍(lán)色剛好褪去為終點(diǎn)。記錄消耗樣品溶液的總體積。平行操作3次，取其平均值。五、結(jié)果處理還原時(shí)(以耄萄時(shí)計(jì))％=——xlOOmxVx1000總轄(以耄萄時(shí)計(jì))％=——xlOOwx^xlO
