資源描述：
《實驗二 總糖和還原糖的測定.doc》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。
1、實驗二總糖和還原糖的測定（二）──3,5－二硝基水楊酸法一、目的要求：掌握還原糖和總糖的測定原理，學(xué)習(xí)用比色法測定還原糖的方法。二、實驗原理:?在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水楊酸（DNS）與還原糖共熱后被還原生成氨基化合物。在過量的NaOH堿性溶液中此化合物呈桔紅色，在540nm波長處有最大吸收，在一定的濃度范圍內(nèi)，還原糖的量與光吸收值呈線性關(guān)系，利用比色法可測定樣品中的含糖量。黃色??桔紅色三、試劑和器材1、試劑（1）1mg/ml葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取干燥恒重的葡萄糖100mg，加少量蒸餾水溶解后，以蒸餾水定容至100ml，即含葡萄糖為1.0mg/ml。（2）3,5—二硝基水楊
2、酸試劑：稱取6.3g3,5—二硝基水楊酸并量取262ml2mol/LNaOH加到酒石酸鉀納的熱溶液中（182g酒石酸鉀納溶于500ml水中），再加5g結(jié)晶酚和5g亞硫酸氫鈉溶于其中，攪拌溶解，冷卻后定容到1000ml貯于棕色瓶中。（3）碘－碘化鉀溶液：稱取5g碘，10g碘化鉀溶于100ml蒸餾水中。（4）6NNaOH：稱取120gNaOH溶于500ml蒸餾水中。（5）0.1%酚酞指示劑。?。?）6mol/LHCl溶液2、材料小麥淀粉或玉米淀粉。3、器材分光光度計，天平，水浴鍋，電爐，試管若干等。四、操作方法?1、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線制作取8支15mm×180mm試管，按下表加入1.0mg/ml葡萄糖
3、標(biāo)準(zhǔn)液和蒸餾水。試劑管號012345678葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液(ml)00.20.40.60.81.01.21.41.6蒸餾水(ml)2.01.81.61.41.21.00.80.60.4水楊酸溶液(ml)1.51.51.51.51.51.51.51.51.5葡萄糖含量(mg)00.20.40.60.81.01.21.41.6將各管溶液混合均勻，在沸水中加熱5min，取出后立即用冷水冷卻到室溫，再向每管加入21.5ml蒸餾水，搖勻。λ=540nm處測定吸光度以葡萄糖含量（mg）為橫坐標(biāo)，光吸收值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。2、樣品中還原糖的提取準(zhǔn)確稱取0.5g小麥（淀）粉，放在100ml燒杯中，先以少量蒸
4、餾水(約2ml)調(diào)成糊狀，然后加入40ml蒸餾水，混勻，于50℃恒溫水浴中保溫20min，不時攪拌，使還原糖浸出混。過濾，將濾液全部收集在50ml的容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度，即為還原糖提取液。3、樣品總糖的水解及提取準(zhǔn)確稱取0.5g小麥(淀)粉，放在錐形瓶中，加入6mol/LHCl10ml，蒸餾水15ml，在沸水浴中加熱0.5h，取出1～2滴置于白瓷板上，加1滴I-KI溶液檢查水解是否完全。如已水解完全，則不呈現(xiàn)藍色。水解畢，冷卻至室溫后加入1滴酚酞指示劑，以6NNaOH溶液中和至溶液呈微紅色，并定容到100ml，過濾取濾液10ml于100ml容量瓶中，定容至刻度，混勻，即為稀釋1000倍
5、的總糖水解液，用于總糖測定。4、樣品中含糖量的測定試劑空白還原糖總糖樣品溶液(ml)01.01.0蒸餾水(ml)2.01.01.0水楊酸(ml)1.501.501.50將各管溶液混合均勻，在沸水中加熱5min，取出后立即用冷水冷卻到室溫，再向每管加入21.5ml蒸餾水，搖勻。λ=540nm處測定吸光度樣品溶液中還原糖和總糖測定后，取樣品的光吸收值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的糖量。五、結(jié)果處理按下式計算出樣品中還原糖和總糖的百分含量：式中：C──還原糖或總糖提取液的濃度，mg/ml；V──還原糖或總糖提取液的總體積，ml；m──樣品重量，g；1000──mg換算成g的系數(shù)。思考題1.比色時為什么要設(shè)計
6、空白管？2.比較費林試劑比色法與3,5-二硝基水楊酸比色法測定可溶性淀粉中還原糖和總糖的結(jié)果，這兩種方法各有何優(yōu)點？親愛的用戶：煙雨江南，畫屏如展。在那桃花盛開的地方，在這醉人芬芳的季節(jié)，愿你生活像春天一樣陽光，心情像桃花一樣美麗，感謝你的閱讀。1、最困難的事就是認識自己。21.7.277.27.202110:5910:59:58七月-2110:592、自知之明是最難得的知識。二〇二一年七月二十七日2021年7月27日星期二3、越是無能的人，越喜歡挑剔別人。10:597.27.202110:597.27.202110:5910:59:587.27.202110:597.27.20214、與肝膽
7、人共事，無字句處讀書。7.27.20217.27.202110:5910:5910:59:5810:59:585、三軍可奪帥也。星期二,七月27,2021七月21星期二,七月27,20217/27/20216、最大的驕傲于最大的自卑都表示心靈的最軟弱無力。10時59分10時59分27-七月-217.27.20217、人生就是學(xué)校。21.7.2721.7.2721.7.27。2021年7月27日星期
