資源描述：
《實驗二總糖和還原糖的測定》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、實驗二總糖和還原糖的測定(3，5～二硝基水楊酸法)《食品生物化學(xué)實驗》課程掌握3，5～二硝基水楊酸法測定待測樣品的總糖和還原糖含量的基本原理，學(xué)會處理721型或722型分光光度計出現(xiàn)的問題一、實驗?zāi)康亩?、實驗原理還原糖的測定是糖定量測定的基本方法。還原糖是指含有自由醛基或酮基的糖類，單糖都是還原糖，雙糖和多糖不一定是還原糖，其中乳糖和麥芽糖是還原糖，蔗糖和淀粉是非還原糖。利用糖的溶解度不同，可將植物樣品中的單糖、雙糖和多糖分別提取出來，對沒有還原性的雙糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有還原性的單糖進行測定，再分別求出樣品中還原糖和總糖的含量（還原糖以葡萄糖含量計）。本實驗是利用
2、3，5～二硝基水楊酸溶液（DNS法）與還原糖溶液共熱后被還原成棕紅色氨基化合物，在一定范圍內(nèi)還原糖的量和棕紅色物質(zhì)深淺的程度成一定比例關(guān)系，可用于比色測定。操作簡便，快速，雜質(zhì)干擾較少。三、實驗步驟1、葡萄糖標準曲線的制定葡萄糖標準液的配制：準確稱取100mg分析純的無水葡萄糖（預(yù)先在105℃干燥至恒重），用少量蒸餾水溶解后，定量轉(zhuǎn)移到100ml容量瓶中，再定容到刻度，搖勻。濃度為1mg/ml。取7支25×250mm的試管，分別按下表加入試劑：管號0123456葡萄糖標準液（ml）00.20.40.60.81.01.2相當于葡萄糖量(mg)00.20.40.60.81.01.2
3、蒸餾水（ml）2.01.81.61.41.21.00.83,5二硝基水楊酸(ml)1.51.51.51.51.51.51.5將各管溶液混合均勻，沸水浴加熱5min，取出后立即用冷水冷卻到室溫，再向每管加入21.5ml蒸餾水，搖勻。于520nm波長處測定OD值。以葡萄糖毫克數(shù)為橫坐標，光密度值為縱坐標，繪制標準曲線。2、樣品中總糖和還原糖含量的測定（1）樣品中還原糖的提取：準確稱取10g新鮮材料（或2g材料干樣粉末），放在100ml燒杯中，先以少量水調(diào)成糊狀，然后加50～60ml蒸餾水，于50℃恒溫水浴中保溫20min，過濾，將濾液收集在100ml容量瓶中，再定容至100ml。（
4、2）樣品中總糖的水解提?。簻蚀_稱取10g新鮮材料（或1g材料干樣粉末），放在錐形瓶中，加入10ml6mol?L-1鹽酸，15ml水，在沸水浴中加熱30min，取出一、二滴置于白瓷板上，加1滴碘～碘化鉀溶液檢查水解是否完全。如已水解完全，則不呈現(xiàn)藍色。冷卻后加入1滴酚酞指示劑，以10%氫氧化鈉溶液中和至溶液呈微紅色，過濾并定容到100ml。再精確吸取上述溶液10ml于100ml容量瓶中，定容至刻度，混勻備用。（3）樣品中糖含量的測定： 取7支25×250mm試管分別按下表加入試劑：管號空白還原糖總糖0123123樣品溶液（ml）01.01.01.01.01.01.0蒸餾水（ml）
5、21.01.01.01.01.01.03,5二硝基水楊酸(ml)1.51.51.51.51.51.51.5OD加完試劑后，與制作標準曲線時相同的操作測定樣品糖含量。四、實驗結(jié)果在Excel繪制葡萄糖標準曲線，并求出標準線性方程。以表格形式列出實驗數(shù)據(jù)，取樣品的OD520平均值用標準線性方程求出相應(yīng)的糖量，并用下式計算出待測樣品中還原糖與總糖的含量。還原糖（mg?g-1）=還原糖毫克數(shù)×提取液總體積（ml）×稀釋倍數(shù)測定用提取液體積（ml）×樣品重量（g）總糖（mg?g-1）=樣品水解后還原糖毫克數(shù)×提取液總體積（ml）×稀釋倍數(shù)測定用提取液體積（ml）×樣品重量（g）五、討論分
6、析1、在被測樣品中，還原糖可能是些什么糖？總糖包括哪些？2、用來測定總糖的樣品，為什么要加鹽酸水解？而在其測定前，又為何要用NaOH中和？3、標準葡萄糖濃度梯度和樣品含糖量的測定為什么應(yīng)該同步進行？比色時設(shè)0號管有什么意義？六、改進實驗建議附：儀器和試劑主要儀器：分光光度計，水浴鍋，容量瓶，刻度試管，移液管等。3,5-二硝基水楊酸試劑：甲液：溶解6.9g結(jié)晶酚于15.2ml10%氫氧化鈉溶液中，并用水稀釋至69ml，在此溶液中加6.9g亞硫酸氫鈉。乙液：稱取255g酒石酸鉀鈉加到300ml10%氫氧化鈉溶液中，再加入880ml1%3,5-二硝基水楊酸溶液。將甲乙二溶液混合即得黃
7、色試劑，貯于棕色瓶中備用。在室溫放置7-10天后使用。6mol?L-1鹽酸10%氫氧化鈉溶液酚酞指示劑碘～碘化鉀溶液：稱取5g碘，10g碘化鉀溶于100ml蒸餾水中。
