海洋養(yǎng)殖水體抗藥性細菌種類及其抗藥性基因攜帶情況的研究

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1、海洋養(yǎng)殖水體抗藥性細菌種類及其抗藥性基因攜帶情況的研究海洋養(yǎng)殖水體抗藥性細菌種類及其抗藥性基因攜帶情況的研究捅要水產養(yǎng)殖過程中抗生素藥物的高劑量及多種藥物混合使用等濫用現(xiàn)象，往往伎水產病原菌在高的選擇壓力下產生更強的耐藥性，多重藥物抗性細菌也時有發(fā)生，大大增加了微生物病害防治的難度，給水產養(yǎng)殖業(yè)帶來嚴重危害。為探討抗性細菌的抗藥性分子遺傳機理，從而為控制抗藥性細菌的產生和傳播提供研究基礎，本研究以由大連刺參、中球海膽、皺紋盤鮑與大菱鲆這四種水體所分離的多抗性細菌篩選為基礎，利用分子生物學方法對這些抗性細菌進行了土霉素、氯霉素及氟氯霉素抗性基因的篩選。通過對

2、分離自這四個養(yǎng)殖水體中的抗性細菌16SrRNA基因序列分析和系統(tǒng)進化樹的構建，這些抗性細菌大部分屬于海洋弧菌(Vibrio)，少數(shù)幾株為假交替單胞菌(Pseudoalteromonas)或交替單胞菌似lteromonas)?；【惥曛写蟛糠譃樗柜R尼亞弧菌(Vibriotasmaniensis)或燦爛弧菌(Vibriosplendidus)。我們采用多重PCR方法分析這些抗性細菌中四環(huán)素抗性基因(tet基因)、氧霉素抗性基因(刪基因)與氟氯霉素(加基因)的分布特征。在對80株抗性細菌胞r基因的分析中，共有tet(A)、tet(B)、tet(D)、tet(

3、E)、tet(M)五種基因單倍型被檢測到，其r扣tet(B)、tet(D)、tet(M)Z種基因的攜帶率最高，分別為33．8％、42．5％、41．3％。對80株抗性細菌cat-與flo基因的分析中，共有catII與catⅣ兩種cat基因基因單倍型被檢測到，它們的檢出率分別為37．5％、18．8％；共36株菌株攜帶floR基因，檢出率為45．O％。研究發(fā)現(xiàn)，大部分耐藥細菌都攜帶多種抗性基因，證明它們的耐藥性主要是由相應抗性基因決定的。關鍵詞：多抗性；海水養(yǎng)殖；土霉素抗性基因；tet基因；氯霉素抗性基因；cat基因；氟氯霉素抗性基因；加JR基因獨創(chuàng)聲明本人聲明

4、所呈交的學位論文是本人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含未獲得(洼；如遺直墓他雷噩掛別直明的：奎攔互窒2或其他教育機構的學位或證書使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學位論文作者簽名：芴州·霍簽字日期：加簿r月節(jié)日學位論文版權使用授權書本學位論文作者完全了解學校有關保留、使用學位論文的規(guī)定，有權保留并向國家有關部門或機構送交論文的復印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權學?？梢詫W位論文的

5、全部或部分內容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編學位論文。同時授權中國科學技術信息研究所將本學位論文收錄到《中國學位論文全文數(shù)據(jù)庫》，并通過網絡向社會公眾提供信息服務。(保密的學位論文在解密后適用本授權書)學位論文作者簽名：乏≯一嚯導師簽字：簽字日期．沙6年多月1日簽字日期．加孑年歲月吵日海洋養(yǎng)殖水體抗藥性細菌種類及其抗藥性基因攜帶情況的研究1前言1．1海洋養(yǎng)殖水體微生物病害及治理現(xiàn)狀水產養(yǎng)殖是提高全球水產品供給量的主要方式，改革開放后我國的水產業(yè)發(fā)展非常迅速，水產品產量以平均每年150萬噸左右的速度增長，據(jù)FAO統(tǒng)計20

6、02年全國水產品產量增加到3659多萬噸，占世界總產量的71．2％和產值的54．7％。近年來隨著育苗技術的提高，我國海水養(yǎng)殖的面積也不斷擴大，產量不斷上升，到2002年海水養(yǎng)殖產量約1132萬噸，海水養(yǎng)殖占養(yǎng)殖產量的30％以上?。我國以海水養(yǎng)殖業(yè)為基礎的“藍色農業(yè)”在緩解人口增長對陸地農業(yè)的壓力，促進沿海地區(qū)經濟的發(fā)展中正發(fā)揮著重要作用，自上世紀八十年代以來，海水養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展迅速，走過了藻、蝦、貝、魚的開發(fā)歷程，形成了“四次浪潮”，使我國一躍而成為世界上唯一養(yǎng)殖產量超過捕撈產量的國家。然而，近年來，世界范圍內海水養(yǎng)殖業(yè)微生物流行性和爆發(fā)性病害相繼發(fā)生，嚴重制

7、約了藍色農業(yè)的健康發(fā)展口1。目前對水產養(yǎng)殖動物細菌病進行控制的主要手段是采用抗菌藥物治療，大量的抗菌素藥類被應用在養(yǎng)殖過程的各個階段，由于對病原學、藥理學等方面認識不全面，在養(yǎng)殖過程中存在高劑量多種藥物混合使用等濫用、亂用藥物現(xiàn)象。這種抗生素的廣泛應用，尤其是濫用，使得細菌在大范圍選擇性壓力下，保留了最耐藥的菌株，細菌耐藥性不僅可通過基因水平在相同或不同種屬細菌中傳播，而且結構完整的耐藥菌株還可以在全球播散∞1。由于細菌具有迅速變異而產生耐藥性的能力，且可轉移、傳播和擴散。所以，人們開發(fā)研制新藥的速度總是跟不上細菌變異耐藥的速度H1，使得微生物病害的防治越

8、來越難。與之俱來更嚴重的問題是這樣培養(yǎng)的水產養(yǎng)殖品往往攜帶耐藥細菌