瓶霉屬Phialophora和外瓶霉屬Exophiala菌株重金屬耐性篩選及分類學(xué)研究

瓶霉屬Phialophora和外瓶霉屬Exophiala菌株重金屬耐性篩選及分類學(xué)研究

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1、LaboratoryofConservationandUtilizationofBio—resourcesYunnanUniversity,Kunming,650091P.R.ChinaDissertationToobtaintheacademicdegreeofmasterofMicrobiologicalSciencesPresentedbyLuWangAdvisedbyProf.Dr.ZhaoZhiwei&A.RTaoLiMay,2013獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外,

2、論文中不包含其他人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果,對本文的研究做出貢獻(xiàn)的集體和個人均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。研究生簽名:互至遂日期:叢!;:!:;論文使用和授權(quán)說明本人完全了解云南大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定,即:學(xué)校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交學(xué)位論文和論文電子版;允許論文被查閱或借閱;學(xué)??梢怨颊撐牡娜炕虿糠謨?nèi)容,可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文。(保密的論文在解密后應(yīng)遵循此規(guī)定)研究生簽名:三趙導(dǎo)師簽名:日期:Ⅲ·;本人及導(dǎo)師同意將學(xué)位論文提交至清華大學(xué)“中國學(xué)術(shù)期刊(光盤版)電子雜志社”進(jìn)行電子和網(wǎng)絡(luò)出版,并編入C

3、NKI系列數(shù)據(jù)庫,傳播本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容,同意按《中國優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫出版章程》規(guī)定享受相關(guān)權(quán)益。,、/,研究生簽名..蔓≥麓!:導(dǎo)師簽名:乏≥ll’,’’f日飆掣羔二羔i摘要云南的重金屬礦產(chǎn)開采范圍廣、歷史悠久,長期大面積的采礦、冶礦己造成嚴(yán)重的土壤重金屬污染,長久地影響著當(dāng)?shù)氐霓r(nóng)業(yè)和經(jīng)濟(jì)的發(fā)展,因此修復(fù)重金屬污染的土壤,是一項(xiàng)長期而又艱巨的任務(wù)。本研究組在開展云南礦區(qū)植物深色有隔內(nèi)生真菌(Darkseptateendophyte,DSE)的相關(guān)研究中發(fā)現(xiàn)瓶霉屬(Phialophora)和外瓶霉屬(Exophiala)真菌是礦區(qū)特殊生境中

4、的優(yōu)勢類群,它們在礦區(qū)植物根部具有較高的定殖率。本論文首先通過分子鑒定的方法確定了來自礦區(qū)和非礦區(qū)的91株瓶霉屬和外瓶霉屬菌株,依次開展了菌株的重金屬抗性篩選實(shí)驗(yàn),篩選到了一批高抗和敏感菌株;對兩屬菌株的ITS區(qū)序列基因進(jìn)行了測序,構(gòu)建了分子進(jìn)化系統(tǒng)樹;對兩屬中的產(chǎn)孢菌株進(jìn)行分類鑒定,確定了部分菌株的分類地位,得出以下結(jié)果和結(jié)論:(1)通過最小抑制濃度(MinimalInhibitionConcentration,MIC)篩選技術(shù)對來自礦區(qū)和非礦區(qū)瓶霉和外瓶霉菌株進(jìn)行了重金屬抗性篩選,得到了部分重金屬高抗菌株和敏感菌株,包括敏感菌株2株,高抗菌株33株,33株

5、高抗菌均分離自重金屬礦區(qū)(瀾滄縣募乃和會澤縣渚海)。比較不同樣地菌株之間,及同一樣地不同菌株之問的MIC值,發(fā)現(xiàn)礦區(qū)菌株的MIC值一般高于非礦區(qū),而同一礦區(qū)菌株之間的MIC值存在著很大的差異。(2)對菌株ITS序列進(jìn)行了分子測序,并構(gòu)建分子系統(tǒng)進(jìn)化樹,根據(jù)兩屬在各樣地的分布情況,并結(jié)合重金屬篩選試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn),分離自西雙版納(非礦區(qū))、募乃、蘭坪礦區(qū)的菌株人多屬于Phialophora,而分離白會澤的菌株則以Exophiala居多。此外環(huán)境及宿主植物對DSE菌株具有一定的“偏好性”。(3)對7株產(chǎn)孢菌株進(jìn)行了形態(tài)學(xué)分類,同時輔以分子鑒定,確立了其中4個菌

6、株的分類學(xué)地位,它們分別是:Phialophoramelinii、Phialophoraluteo—olivacea、Exophialasalmonis和Exophialapisciphiala,另有兩株菌屬于Exophiala,可能是新的分類單元。關(guān)鍵詞:深色有隔內(nèi)生菌;瓶霉屬;外瓶霉屬;分類學(xué);系統(tǒng)學(xué);重金屬抗性AbstractYunnanhasalonghistoryandawiderangeofmining.Long—termminingandsmeltinginlargeareashavecausedserioussoilheavymetalpoll

7、utioninlocal,andthenimpactedonthelocalagriculturalandeconomicdevelopment.Thus,eliminatingheavymetalsfromcontaminatedsoilisalongandarduoustaskforYunnan.Ourresearchgrouphascarriedoutdarkseptateendophyte(DSE)researchformanyyears,andalotofDSEstrainswereisolated.AmongtheobtainedDSE,Phial

8、ophoraandExophialaa

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