嗅球成鞘細(xì)胞體外培養(yǎng)、鑒定、神經(jīng)營養(yǎng)和成髓鞘作用的研究

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1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文嗅球成鞘細(xì)胞體外培養(yǎng)、鑒定、神經(jīng)營養(yǎng)和成髓鞘作用的研究姓名：黃曉芳申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：神經(jīng)生物學(xué)指導(dǎo)教師：謝富康2003.5.30墮堡壁塑塑墮堡!!墮董：鑒塞：塑絲箜鲞塑壁塑塑堡旦塑塹壅一——一—————j墼生—一嗅球成鞘細(xì)胞體外培養(yǎng)、鑒定、神經(jīng)營養(yǎng)和成髓鞘作用的研究碩士研究生：黃曉芳導(dǎo)師：謝富康教授中山大學(xué)中山醫(yī)學(xué)院組織胚胎學(xué)教研室，廣州510080摘要，《長期以來，中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷后再生一直是困擾醫(yī)學(xué)界的難題。目前研究發(fā)現(xiàn)，中樞神經(jīng)軸突再生困難的原因并非是神經(jīng)元自身的原因，而是軸突周圍膠質(zhì)環(huán)境抑制

2、軸突再生。嗅神經(jīng)終身具有再生的能力，這種能力與嗅神經(jīng)通路上特殊的膠質(zhì)細(xì)胞——嗅球成鞘細(xì)胞(0ECs)有密切關(guān)系。嗅球成鞘細(xì)胞既具有某些施萬細(xì)胞的性質(zhì)，同時又有星型膠質(zhì)細(xì)胞的某些特質(zhì)。已有研究證明，這種細(xì)胞無論在體內(nèi)還是體外都能促進軸突的生長；移植體內(nèi)后，能在軸突周圍形成髓鞘上本課題的研究目的是探討嗅球成鞘細(xì)胞體外培養(yǎng)、純化和增殖的方法，構(gòu)建成髓鞘的體外模型，為研究髓鞘的形成過程和機制提供途徑，為進一步研究嗅球成鞘細(xì)胞在中樞神經(jīng)再生中的應(yīng)用提供基礎(chǔ)資料。廠＼第一部分：獲取新生sD大鼠嗅球神經(jīng)纖維層，酶消化法制成細(xì)胞懸液，阿糖胞

3、苷純化，DMEM／F12+10％FCS和DMEM／F12+B27培養(yǎng)液交替培養(yǎng)，加牛垂體提取液(BPE)促增殖，一周后行神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞特異性抗原GFAP，S--100和髓鞘堿性蛋白(MBP)免疫組化鑒定。結(jié)果：嗅球成鞘細(xì)胞形態(tài)與施萬細(xì)胞相似，其特點是突起細(xì)長且直，呈針樣。經(jīng)純化后的OECs純度可達95％以上。細(xì)胞呈GFAP(+)(95％)，S一】00(+)(83％)和MBP(+)(90％)。第二部分：聯(lián)合培養(yǎng)新生大鼠嗅球成鞘細(xì)胞和背根節(jié)神經(jīng)元作為實驗組，聯(lián)合培養(yǎng)施萬細(xì)胞和背根節(jié)神經(jīng)元為對照組1，單獨培養(yǎng)背根節(jié)神經(jīng)元為對照組2。

4、培養(yǎng)5天，7天，10天后，行GAP--43免疫組化染色，分別計數(shù)各組陽性細(xì)胞數(shù)，通過圖象分析測量各組GAP--43陽性細(xì)胞初級突起長度，統(tǒng)計學(xué)分析比較嗅球成鞘細(xì)胞體外培養(yǎng)、鑒定、神經(jīng)營養(yǎng)和成髓鞘作用的研咒摘要各組陽性細(xì)煦數(shù)、陽性細(xì)胞率和神經(jīng)元初級突起長度。結(jié)果：培養(yǎng)5、7、10天時，實驗組單位面積(o．25ram2)內(nèi)的陽性紉胞數(shù)分別為43、39、28；對照組】陽性細(xì)胞數(shù)分別為44、3l、14；對照組2為43、12、3。實驗組陽性細(xì)胞率為92．98％、31．23％、24．87％；對照組1為92．59％、23．17％、15．0

5、6％。培養(yǎng)5、7、10天神經(jīng)元初級突起長度，在實驗組分尉為65611m、712um、834um；對照組1為643扯m、67]pm、752um。各組之間有顯著性差異。和膠質(zhì)細(xì)胞聯(lián)合培養(yǎng)的神經(jīng)元的存活情況明顯優(yōu)于單獨培養(yǎng)的神經(jīng)元。神經(jīng)元和嗅球成鞘細(xì)胞聯(lián)合培養(yǎng)比和施萬細(xì)胞聯(lián)合培養(yǎng)存活率高，初級突起長度長。說明嗅球成鞘細(xì)胞對神經(jīng)元的促進作用更佳。第三部分：聯(lián)合培養(yǎng)新生大鼠嗅球成鞘細(xì)胞和背根節(jié)神經(jīng)元，培養(yǎng)2、3、4周透射電鏡觀察髓鞘形成情況。結(jié)果：培養(yǎng)3周后，軸突周圍有髓鞘形成，髓鞘層次隨培養(yǎng)時間延長而增多。L，總結(jié)三部分實驗結(jié)果，得

6、到以節(jié)結(jié)論：／1．從新生大鼠嗅球的神經(jīng)纖維層分離培養(yǎng)的嗅球成鞘細(xì)胞能表達GFAP、S100和MBP，OECs是一類不同予施萬細(xì)胞和星型膠質(zhì)細(xì)胞的膠質(zhì)細(xì)胞。2．OECs和背根節(jié)神經(jīng)元聯(lián)合培養(yǎng)，能促進神經(jīng)元的存活和突起的生長。3-OECs和塑童蹩元聯(lián)合培養(yǎng)，能夠在軸突周圍形成髓鞘?！娟P(guān)鍵詞】嗅球成鞘細(xì)胞：聯(lián)合培養(yǎng)；髓鞘：神經(jīng)突起堅堡墮塑塑墮笪!!苧莖：笙塞：!!絲笪莖塑垡堡塑笪塑墮竺窒一———————萎苧塑蘭一Thestudyofcellculture，identificationofolfactoryensheathingce

7、llsandtheirneurotrophicfunctionandmyelinationMasterCandidate：HuangXiaofangSupervisor：XieFukangDepartmentofHistologyandembryology,SunYat-senMedicalCollege,SunYat-senUniversity,Guan舀zhou510080AbstractAxonalregenerationinthelesionedmammaliancentralnervoussystem(CNS)is

8、usuallyabomve．ThefailureoftheregenerationoftheCNSisnotduetotheneurons．butthemicroenvironment．TheolfactorybulbisanexceptionalCNStissue．Unlikeother