堿水解法提高黃芪藥材中黃芪甲苷的工藝研究

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1、堿水解法提高黃芪藥材中黃芪甲苷的工藝研究作者：張金紅，周晶，宋慧琴，吳志麗【摘要】目的建立堿水解法提高黃芪藥材中黃芪甲苷收率的最佳工藝。方法以黃芪甲苷的收率為考察指標(biāo)，采用正交實(shí)驗(yàn)對黃芪甲苷的提取工藝進(jìn)行優(yōu)選?？疾霳aOH濃度、水解時(shí)間及料液比對黃芪甲苷收率的影響，采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射法(HPLC-ELSD)測定其含量。結(jié)果NaOH溶液的濃度對黃芪甲苷的收率起主要作用，最佳工藝條件為：NaOH溶液的濃度為0.100mol·L-1，室溫靜置水解2h，黃芪藥材與堿溶液的料液配比為1∶12，黃芪甲苷的含量

2、約是未經(jīng)堿水解組的16.4倍。結(jié)論堿水解法可顯著提高黃芪藥材中黃芪甲苷的含量。方法簡便易行，實(shí)用價(jià)值高，為工業(yè)化生產(chǎn)提供了依據(jù)?！娟P(guān)鍵詞】堿水解法;黃芪;黃芪甲苷;正交試驗(yàn)　黃芪為豆科植物蒙古黃芪Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao或膜莢黃芪Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bge的干燥根。黃芪皂苷是黃芪的主要藥效物質(zhì)之一，黃芪皂苷大部分是以環(huán)黃芪皂醇為苷元的皂苷，黃芪甲苷(astragalosid

3、eⅣ9)為其主要成分[1]，常作為黃芪藥材及其制劑的質(zhì)量控制定量的指標(biāo)。藥理研究表明，黃芪甲苷具有強(qiáng)心護(hù)心、保護(hù)神經(jīng)系統(tǒng)及內(nèi)皮屏障功能、改善血液流變學(xué)、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能、抗衰老、抗胃潰瘍等功能，此外，還具有降血壓、鎮(zhèn)痛鎮(zhèn)靜、促進(jìn)胰島素分泌等作用[2]。黃芪甲苷雖然藥理作用顯著，但其在黃芪藥材中的含量很低，提取分離較困難，使其應(yīng)用受到極大的限制。本研究利用皂化反應(yīng)原理，在NaOH作用下將環(huán)黃芪醇皂苷轉(zhuǎn)化為黃芪甲苷，通過正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選黃芪甲苷轉(zhuǎn)化的最佳條件，提高黃芪甲苷的收率，為黃芪甲苷單體制劑的研制開發(fā)奠定研究

4、基礎(chǔ)?！　?儀器與試藥　　1.1儀器Agilent1100高效液相色譜儀，Alltech2000ES型蒸發(fā)光散射檢測器，AT-330柱溫箱(天津奧特賽恩斯儀器有限公司)，XWK-3A空氣泵(天津市華生分析儀器廠);SZ-93自動(dòng)雙重純水蒸餾水器(上海強(qiáng)運(yùn)科技有限公司);BP-211D電子分析天平(德國賽多利斯公司);KS-600D超聲清洗機(jī)(寧波科生儀器廠);W2-100旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海申生科技有限公司);PHS-25型酸度計(jì)(杭州亞美電子儀器廠)?！　?.2試藥黃芪甲苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號

5、為110781-200613);黃芪藥材(購自天津市藥材公司，批號為Y0805267，由天津醫(yī)科大學(xué)生藥學(xué)教研室周曄教授鑒定，符合《中國藥典》2005年版Ⅰ9部要求);AB-8型大孔吸附樹脂(南開大學(xué)樹脂廠);乙腈(天津康科德科技有限公司，批號：080426)色譜純，氫氧化鈉為分析純;流動(dòng)相用水為重蒸水。2方法與結(jié)果　　2.1色譜條件及系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)色譜柱：DiamonsilC18(4.6mm×250mm，5μm);流動(dòng)相：乙腈-水(34∶66);體積流量：1.0ml·min-1;柱溫：35℃;漂移管溫度：

6、105℃;載氣流量：2.5L·min-1;壓力：0.4MPa;進(jìn)樣量：10μl。此色譜條件下，黃芪甲苷色譜峰與樣品中其他組分色譜峰可達(dá)基線分離，分離度大于1.5，理論塔板數(shù)以黃芪甲苷峰計(jì)不低于4000?！　?.2黃芪藥材提取液的制備稱取黃芪藥材200g，置于圓底燒瓶中，各次加乙醇量分別為藥材干重的10，8，8倍，90℃水浴回流提取3次，各次回流時(shí)間分別為2，1.5，1h。每次回流后趁熱過濾，濾液合并濃縮后定容至500ml，備用。精確吸取上述提取液5ml，按設(shè)定的實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行水解后，調(diào)節(jié)pH至中性，上AB-8

7、型大孔吸附樹脂，流出液重復(fù)上樣一次，用3BV蒸餾水洗脫樹脂，再用4BV70﹪乙醇洗脫樹脂，收集70﹪乙醇洗脫液，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮近干，用70﹪乙醇溶解并定容于10ml量瓶中，過0.45μm微孔濾膜，取續(xù)濾液，即得黃芪藥材樣品液。a.黃芪甲苷對照品;b.堿水解前樣品;c.堿水解后樣品;1.黃芪甲苷圖1黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)品及黃芪藥材提取液堿水解前后的HPLC圖9　　2.3方法學(xué)考察　　2.3.1線性關(guān)系的考察準(zhǔn)確稱取經(jīng)減壓真空干燥至恒重的黃芪甲苷對照品24.7mg，置于50ml量瓶中，加甲醇超聲溶解并稀釋至刻度，

8、搖勻，作為儲(chǔ)備液。分別精密吸取黃芪甲苷對照品儲(chǔ)備液0.25，0.5，1，2，4，6，8ml，置于10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，分別精密吸取上述溶液各20μl，注入高效液相色譜儀，按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定黃芪甲苷的峰面積，以黃芪甲苷進(jìn)樣量(μg)的自然對數(shù)值為橫坐標(biāo)(X)，以峰面積的自然對數(shù)值為縱坐標(biāo)(Y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計(jì)算回歸方程，Y=1.3768X+12.829，r=0.9998。黃芪甲苷在0.2