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《小麥抗條銹病基因Yr5分子標記的鑒定》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、東北農業(yè)大學碩士學位論文小麥抗條銹病基因Yr5分子標記的鑒定姓名：陳曉紅申請學位級別：碩士專業(yè)：植物學指導教師：胡寶忠;牛永春2003.6.1摘要小麥條銹病是一種世界性病害，嚴重威脅著小麥生產。在抗病育種中應用分子標記輔助選擇有利于實現(xiàn)抗條銹病多基因積累，加速持久抗病品種的培育進程。以小麥抗條銹病基因Yr5的供體親本Triticumspdtaalbum作為對照，對近等基因系YrS／6xAvocetS和感病親本AvocetS進行RAPD分析。擴增產物用4％變性PAGE分離，銀染顯色?？梢詸z測到50～100條帶，是瓊脂糖凝膠電泳的5倍以上。本研究篩選了
2、240個隨機引物，發(fā)現(xiàn)23條穩(wěn)定的多態(tài)性DNA片段。可見，該方法顯著提高了小麥RAPD分析的多態(tài)性水平。而且，由于PAGE能夠穩(wěn)定檢出低拷貝的擴增片段，也改善了RAPD分析的重復性。／對23條多態(tài)性DNA片段與Yr5基因的遺傳連鎖性進行初步檢測，確定了分別由5條引物擴增的S13202∞、S1348363、S1476Ⅲ、S1476∞l、S1397830、S1380359共6條多態(tài)性片段與Yr5基因有連鎖性。將其中連鎖性好的多態(tài)性片段S1320207、S1348363、S1476401進行克隆、測序，并根據(jù)序列設計特異性引物。用121株AvocetS和
3、Yr5／6×AvocetS雜交制備的F2代分離群體進一步進行遺傳連鎖性檢測。特異擴增產物SC-S1320l"與7r5基因完全連鎖；標記SC．S13483劈與Yr5基因緊密連鎖(交換率0．008)，表明已經成功轉化為TrS基因的SCAR標記。y對小麥抗條銹病基因Yr5的近等基因系材料，提取接種后1211、24h、48h葉片的總RNA，制備三個時間段的eDNA模板。根據(jù)已克隆R基因普遍具有的NBS結構域的P-loop、Kinase-2a、Kinase．3a、EGF區(qū)設計5條RGA簡并引物，組成5對引物組合。用相同的模板與引物，在低嚴謹條件下擴增，獲得4
4、條多態(tài)性片段；在高嚴謹條件下擴增，發(fā)現(xiàn)l條多態(tài)性片段D-4。將引物組合Nl-E1擴增抗病和感病材料的產物分別回收作為模板，用引物組合K2
5、．El和Touchdown程序再擴增，檢測到1條550bp左右差異DNA帶，記為RD-1；將引物組合K2,-E擴增抗病和感病材料的產物分別回收作為模板，用引物組合KhS-El和Touchdown程序再擴增，檢測到l條470bp左右差異DNA帶，記為RD-2。用巢式PCR兩次擴增目的DNA片段，提高了特異性。更有利于目的DNA片段檢出。關鍵詞小主濼諺猜；抗病塞囪；M：分子滌毛V，l—————————2鎏型生塑塑生堂
6、警圣———————一IdentificationofRAPDMarkersLinkedtotheResistanceGeneYr5againstWheatStripeRustAbstractStriperust(yellowrust)。causedbyPucciniastriiformisWest．￡sp．tritici，isoneofthemostimportantdiseasesonwheatthroughouttheworld．Itisaneffectivewaytobreedresistantcultivarsconferringmajor
7、resistancegenebymaker-assistedselection，whichwouldacceleratebreedingprogram．RAPDanalysisWaSperformedbetweenanear-isogenicline(NIL)Yr5／6×AvocetScarryingtheresistancegeneYr5againstwheatstriperustanditssusceptibleparentAvocetS，usingtheYr5genadonorparentTriticumspeltaalbumascontr0
8、1．AmplifiedDNAfragmentswereseparatedwith4％denaturingPAGE(polyacrylamidegelelectrophoresis)anddisplayedbysilverstaining．Fiftyto100bandsweredetected,5foldsmorethanthatrevealedonagsrosegels．Atotalof240randomprimerswerescreened,and23reproduciblepolymorphicDNAfragmentswerefound。The
9、resultssuggestedthatusingdenaturingPAGE-silverstainingcouldre
