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1、牛大力多糖對(duì)免疫抑制小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用【摘要】目的探討牛大力多糖對(duì)免疫功能低下小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用。方法采用環(huán)磷酰胺和荷瘤的方法建立免疫抑制小鼠動(dòng)物模型，小鼠以灌胃的方法給予不同劑量牛大力多糖，利用MTT檢測(cè)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化及巨噬細(xì)胞吞噬中性紅實(shí)驗(yàn)，分析牛大力多糖對(duì)免疫抑制小鼠的影響。結(jié)果牛大力多糖可增強(qiáng)吞噬細(xì)胞的吞噬功能，增加抗體形成細(xì)胞的數(shù)量，促進(jìn)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化。結(jié)論牛大力多糖明顯具有增強(qiáng)小鼠免疫功能的作用，以高劑量組效果最為顯著?！娟P(guān)鍵詞】牛大力多糖；環(huán)磷酰胺；荷瘤；免疫調(diào)節(jié)Abstract：ObjectiveToin
2、vestigateimmunoregulatoryactivityofpolysaccharideofNiudali(NDLS)onimmunosuppressedmice.MethodsThemodelsofimmunosuppressedmicewereestablishedbytreatingwithcyclophosphamideandtumor-bearing.DifferentdosesofNDLSwereorallyadministeredtothemice.MTTmethodwasusedtoobse
3、rvetheproliferationoflymphocytesandthefunctionofmacrophagesinabdominalactivitywasalsomeasured.Spectrophotometrywasadoptedtoevaluatetheabilityofplaqueformingcells.ResultsNDLSenhancedthefunctionofmacrophage,increasetheamountofplaqueformingcells,andpromotetheproli
4、ferationof8lymphocytes.ConclusionNDLScanenhancetheimmunofunctionofimmunosuppressedmice.Keywords：polysaccharideofNiudali;cyclophosphamide;tumor-bearing;immunoregulation牛大力為豆科崖豆藤屬植物美麗崖豆藤（MillettiaspecisoaChamp），以根入藥，始載《花草藥性備要》全年可采。以秋季挖根為佳。其性平，味甘，歸肺、腎經(jīng)。具有補(bǔ)虛潤(rùn)肺、強(qiáng)筋活絡(luò)
5、的功能，藥理研究表明其對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠B淋巴細(xì)胞分泌特異抗體及T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生白介素-2具有免疫調(diào)節(jié)作用［1］。但是對(duì)于牛大力的化學(xué)成分及其生物活性少有報(bào)道，本實(shí)驗(yàn)研究了牛大力多糖（NDLS）對(duì)環(huán)磷酰胺(Cy)和荷瘤所致免疫功能低下小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用，以期為牛大力的開(kāi)發(fā)研究提供基礎(chǔ)依據(jù)。1材料與方法1.1藥物牛大力經(jīng)南方醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院中藥鑒定教研室陳興興鑒定，用無(wú)菌生理鹽水配成所需濃度。1.2試劑與儀器8（1）試劑：1640培養(yǎng)液、MTT、ConA均為Hyclone公司產(chǎn)品。Cy為上海第十二制藥廠產(chǎn)品。（2）儀器：DG3
6、022型酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀，華東電子儀器廠；721型分光光度計(jì)，上海第三分析儀器廠生產(chǎn)；5%CO2培養(yǎng)箱(WJ-3A)，上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠。1.3動(dòng)物KIH種小白鼠50只，體重18~22g，由南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，雌雄各半。1.4實(shí)驗(yàn)方法1.4.1分組及給藥KIH種小鼠50只，體重18~22g，雌雄各半，隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、NDLS低中高劑量組(100、200、400mg/kg)，每組10只。對(duì)照組、模型組給予同容量的生理鹽水，每天1次，連續(xù)10d。1.4.2造模［2］于給藥第4天ip60mg/kgCy，建立
7、免疫低下小鼠模型。無(wú)菌條件下抽取接種7d小鼠的腹水，用滅菌生理鹽水1:3稀釋，接種小鼠足趾皮下，0.2ml/只，于接種后第2天開(kāi)始給藥，10d后處死小鼠，建立荷瘤小鼠模型。1.4.3抗體形成細(xì)胞(PFC)的測(cè)定［3~4］采用溶血分光光度法，于給藥第4天ip5%新鮮無(wú)菌綿羊紅細(xì)胞(SRBC)懸液0.2ml進(jìn)行免疫，末次給藥后1h處死小鼠，制備脾細(xì)胞懸液，取1×107脾細(xì)胞懸液、1:10豚鼠血清和0.2%SRBC各1ml混勻，37℃水浴18h，離心取上清，用721分光光度計(jì)在560nm處測(cè)吸光度。1.4.4淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)
8、驗(yàn)［5］給藥結(jié)束后處死動(dòng)物，無(wú)菌取脾，制備脾細(xì)胞懸液。將同一組細(xì)胞懸液混合，調(diào)細(xì)胞濃度為5×106/ml，取150μl細(xì)胞懸液加入96孔培養(yǎng)板，并加入50μlConA(終濃度2μg/ml)，置37℃5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)48h，棄上清，加MTT10μl孵育4h，每孔加酸化異丙醇100μl，用酶標(biāo)儀在570nm處測(cè)定吸光度。1.4.5腹腔巨噬細(xì)胞吞
