超排卵周期生長分化因子9和生長分化因子9B表達(dá)及調(diào)控研究

《超排卵周期生長分化因子9和生長分化因子9B表達(dá)及調(diào)控研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。

1、分類號：R711密級：內(nèi)部2年學(xué)位類別：科學(xué)學(xué)位囹?qū)I(yè)學(xué)位口0學(xué)校代碼：1062學(xué)號：20081078學(xué)科門類：醫(yī)學(xué)又洱醬科矢崢￥IANJINMEDICALU樹lVERSI"博士學(xué)位論文DOCTORALDISSERTATIoN論文題目：超排卵周期生長分化因子9和生長分化因子9B表達(dá)及調(diào)控研究TITLETheresearchofGDF一9GDF一9Bexpressionandregulationinsuperovulationcycle一級學(xué)科：臨床醫(yī)學(xué)二級學(xué)科：婦產(chǎn)科學(xué)論文作者：王會妍指導(dǎo)教師：糜若然導(dǎo)師組成員：張云山天津醫(yī)科大學(xué)研究生院二。一一年五月學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲

2、明：所呈交的論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)下獨立進(jìn)行研究工作取得的研究成果。除了文中特別加以標(biāo)注引用的內(nèi)容和致謝的地方外，論文中不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。學(xué)位論文作者簽名：皇篁蘭牢日期：2。11年5月1。日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解天津醫(yī)科大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，并采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編以供查閱和借閱。同意學(xué)校向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文，并編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫。保密囹，在—三年解密

3、后適用本授權(quán)書。本論文屬于不保密口。(請在相對應(yīng)的方框內(nèi)打“√”)學(xué)位論文作者簽名：皇：紐日期：2。11年5月1。日導(dǎo)師簽名：雄日期：2?！ぁつ?月·。日天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文中文摘要輔助生殖技術(shù)(AI盯)尤其是體外受精．胚胎移植(IVF．ET)的開展和成熟是治療不孕、不育癥最為行之有效的手段?？刂菩猿怕咽荌VF—ET妊娠率逐步提高的原因之一，然而不同個體的卵巢對外源性促性腺激素(Gn)有不同的反應(yīng)。卵巢低反應(yīng)的發(fā)生率約為12％～30％，以超排卵后獲卵數(shù)目少和血雌二醇(E2)峰值低為特征，常導(dǎo)致治療周期取消和低妊娠率，甚至部分患者只能選擇贈卵。因此如何評估和改善超排卵周期卵巢

4、低反應(yīng)是IVF工作中亟待解決的難題。生長分化因子．9(GDF．9)、GDF一9B作為卵源性生長因子近年來被發(fā)現(xiàn)可能是卵泡發(fā)育過程的關(guān)鍵調(diào)控因子，二者隸屬轉(zhuǎn)化生長因子．B(TGF．p)家族，通過自分泌及旁分泌方式作用于卵母細(xì)胞、顆粒細(xì)胞及卵泡膜細(xì)胞，調(diào)節(jié)卵巢局部細(xì)胞的分化、增殖，調(diào)控優(yōu)勢卵泡的形成及卵母細(xì)胞的成熟。研究GDF．9、GDF．9B表達(dá)與超排卵卵巢低反應(yīng)的關(guān)系及調(diào)控機制，為臨床改善卵巢功能、提高獲卵率提供理論依據(jù)。第一部分GDF-9、GDF-9B表達(dá)與卵巢低反應(yīng)的關(guān)系目的：研究超排卵周期GDF．9、GDF．9B表達(dá)與卵巢低反應(yīng)的關(guān)系，探討二者是否參與卵巢低反應(yīng)的發(fā)生機制。

5、方法：選取行ⅣF．ET的患者70例，采用常規(guī)長方案進(jìn)行超排卵，依據(jù)取卵時獲得平均直徑>14ram的卵泡數(shù)分為卵巢低反應(yīng)組21例，正常反應(yīng)組25例，高反應(yīng)組24例。應(yīng)用實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real．timePCR)技術(shù)檢測卵巢不同反應(yīng)組患者卵泡壁顆粒細(xì)胞和卵丘顆粒細(xì)胞GDF．9mRNA、GDF．9BmRNA的表達(dá)，分析GDF．9和GDF．9B與卵巢低反應(yīng)的關(guān)系，以及二者與超排卵獲卵數(shù)的相關(guān)性。結(jié)果：卵巢不同反應(yīng)組患者年齡、不孕年限、基礎(chǔ)FSH、E2、LH水平差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>O．05)。卵巢低反應(yīng)組卵泡壁顆粒細(xì)胞和卵丘顆粒細(xì)胞的GDF．9mRNA相對表達(dá)量低于正常反應(yīng)組

6、及高反應(yīng)組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P

7、段插入真核表達(dá)載體pcDNA3．1(+)，構(gòu)建重組真核表達(dá)載體pcDNA3．I(+)／GDF．9；重組質(zhì)粒以脂質(zhì)體介導(dǎo)法轉(zhuǎn)染人胚腎293T細(xì)胞誘導(dǎo)表達(dá)，免疫親和層析法純化目的蛋白。結(jié)果：陽性克隆質(zhì)粒經(jīng)酶切鑒定和測序結(jié)果證明pcDNA3．I(+)／GDF．9重組真核表達(dá)載體構(gòu)建成功，Westernblotting確證純化重組GDF．9蛋白成功獲得。第三部分重組蛋白GDF-9對小鼠超排卵的影響目的：通過體內(nèi)動物模型觀察重組蛋白GDF．9對小鼠超排卵的影響，深入分析GDF．9對卵泡發(fā)育