EGFR基因重組噬菌體疫苗的構(gòu)建及抗腫瘤效應(yīng)的初步研究

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1、鄭州丈學(xué)2005華碩士學(xué)位論文EGFR基因重組噬螢體疫苗的掬建及抗辨癬效應(yīng)豹狃步研究EGFR基因重組噬菌體疫茁的構(gòu)建及抗舯瘸效應(yīng)孵褫步研究研究生曾憲卓導(dǎo)舜李磽文談立松鄭州大學(xué)醫(yī)學(xué)院細(xì)胞生物學(xué)與醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)教研室鄭州450052摘要諾的：案l備5個(gè)表達(dá)雞源表皮生長(zhǎng)嗣予受體(cEGFR)部分肽段的纂圓重組，r7噬楚體疫繁，梭測(cè)其粥耀按露性，并初步蹣察其誘導(dǎo)產(chǎn)生的肉源住抗蕊球抗秫在C57BL／6J純系小鼠Lewis黔癬模型上的抗熟癭效果。方法：需RT-PCR方法從雞犟丸組織總RNA中覓隆出EGFR膜外區(qū)基因片段，將其癱陵餮載體pMDl8-TVector上，并轉(zhuǎn)能葳c

2、oliDIt5《感受態(tài)細(xì)魏，放陽性巍賺中提取震粒，瓣該基因片段進(jìn)行測(cè)序。臻DNAStar軟件對(duì)基因?qū)︹诘牡白匀懒羞M(jìn)行分輯，選取親水牲離、摭鷹l牲強(qiáng)魏區(qū)段，設(shè)幸}5對(duì)孳；物，將PCR擴(kuò)增拍片段甄克隆到鉀噬菌體上。經(jīng)篩選的5個(gè)肽段分劃展示予其農(nóng)堯次要頭騷寤(Pl鸛)上，攙建了5個(gè)cEGFR蕊戳重縊譬?噬毽體痰替。硝該藿綴曦菌體侵染其宿主菌，液體擴(kuò)增并純化出重組噬蘊(yùn)體疫苗。經(jīng)SDS-PAGE電泳及WesternBlot抗豫經(jīng)襝灝，確認(rèn)cEGF"T7PloB融合蛋臼的表達(dá)情況及其EGFR抗原性。用該重組噬蘸體疫懿經(jīng)腳掌、皴下及暇下皮內(nèi)莘疆頸背部皮下多點(diǎn)綴合免疫4w

3、齡的C57BL／6J純系小鼠，每周1次，連續(xù)4w。兔痰3w的小鼠血漬與贏表達(dá)EGFR的A431纓腮孵彎，揀鼠熒光二抗標(biāo)記，流式緇藏僅法梭涌被標(biāo)記的綱穩(wěn)，確認(rèn)特舞性鼠抗EGFR摭體的產(chǎn)裳。免疫瓤簇，腿部熟撼嶷下接釋縫系Lewis精癌綱藤株，建立cgTBL／6J純系小鼠Lewis肺癌動(dòng)物模型，10d最小心分離瘸體，備實(shí)驗(yàn)治療維與空囊噬菌體對(duì)照綴瘤體均重兩兩玩較采雨f檢驗(yàn)，觀察各實(shí)驗(yàn)治療綴的抗胂癌效果。幫矧失掌2005年磷士舉位遺文至GFR蘸瓣霍縫噬莛蔣疫蘩麴聿黿建愛拭瓣瘞教或熬鋸步研究結(jié)果：雞睪丸組織總RNA的RT-PCR產(chǎn)物緞l％的瓊脂糖凝膠電泳，確認(rèn)目標(biāo)條帶

4、鏡置正確。從轉(zhuǎn)讓的克隆揀中封§取陽性斃隧，經(jīng)質(zhì)粒提取和測(cè)序，確認(rèn)成功克除了cEGFR膜矯區(qū)段基因。戳迸克隆弓l耪(Primerll、PrirnerlII、PrimerlV、PrimerV、PrimerVI)PCR擴(kuò)增目標(biāo)重組片段，經(jīng)1．5％瓊脂糖凝膠電泳，目標(biāo)帶位置與預(yù)期蚴合。5個(gè)cEGFR．．T7DNA綴PCR擴(kuò)增，諼實(shí)亞克隆片斷被成功竟黢剿霄噬菌體基因綴中，SDS-PAGE憊泳及WesternBlot撬藤性檢濺確認(rèn)，表達(dá)的cEGFR—T7P10B融合蛋白具材EGFR抗原能，成功構(gòu)建了5個(gè)cEGFR港因重組T7聰慧搏疫營(yíng)。兔疫3W豹小甌嫩漬經(jīng)熒光摭記法流式

5、細(xì)魏儀檢測(cè)，確認(rèn)有特異性鼠抗EGFR抗體產(chǎn)生。并量成功建立了C57BL／63純系小鼠Lewis肺癮動(dòng)物模型，備實(shí)驗(yàn)治療組瘸體均重統(tǒng)計(jì)縮果顯示P．．CLl。670組、P．epl．130組、P．ep2一136組、p．cp3-145組、p噸融142綴與空自噬菌體辯照組差異性鼴著(尹

6、原始立體構(gòu)泌的形成，嘲而具有更好的免疫原性。兼鍵詞：表皮嫩長(zhǎng)因子受體，T7噬菌體，噬菌體展示技術(shù)，噬菌體疫苗II鄭州大學(xué)2005if-碩士學(xué)位論文EGFR基隧霪組啦鎣體疫茁的構(gòu)建段抗腫癌效斑的翩步研究ANANTI．TUMORRESEARCHoFRECO剮[BINANTP姒GEV_ACClNEEXpRESSEDX戴NoGENlCEGFRPostGraduate：ZengXianzhuoTutor：LiXiaowenTanLisongDepartmentofCellBiologyandMedicalGenetics,MedicalCollege,Zhengzho

7、uUniversityZhengzhou450052ChinaABS薯RAC攀Objective：Toconstruct5recombinantT7phagevaccinesdisplayextracellular1-e癭onsofchickenepidernudgrowthfactorreceptor(cEGFR)andverifytheirEGFRantigenicity．Toinvestigatetheanti-tumore商ectoftheendogenousantibodiesinducedbythesegenerecombinantphageva

8、ccinesonaC57BLl6J-LweisLun