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《檢測孕婦血漿中胎兒DNA在產(chǎn)前診斷的初步研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學術(shù)論文-天天文庫。
1、碩士掌位論文檢測孕婦血漿中胎兒DNA在產(chǎn)前診斷的初步研究中文摘要檢測孕婦血漿中胎兒DNA在產(chǎn)前診斷的初步研究碩士研究生吳菁導師黃艷儀教授陳小蔓副主任醫(yī)師摘要近幾十年來，遺傳病和先天畸形的發(fā)病率相對升高，對人類健康的威脅已日益嚴重。眾所周知很多遺傳性疾病和先天畸形是無法治愈的，要求在產(chǎn)前做出診斷，及早采取適當?shù)拇胧?。降低出生缺陷率。目前I臨床上產(chǎn)前診斷的取材方法大多是創(chuàng)傷性的，它們對產(chǎn)婦和胎兒都不同程度的存在著流產(chǎn)、感染等不安全的因素，故產(chǎn)前診斷的對象僅限于某些高危妊娠的孕婦，對整個人群出生缺陷率的降低意義不大。多年來許多學者一直
2、探求將非創(chuàng)傷性的方法用于產(chǎn)前診斷，使之可以應(yīng)用于大規(guī)模的人群，降低出生缺陷率，對于提高人口素質(zhì)具有重大意義。在妊娠期間胎兒的血液循環(huán)和母體的血液循環(huán)被胎盤膜隔開，但各種證據(jù)顯示母血中存在著胎兒細胞，表明胎盤并不能完全阻礙細胞通行，這就提示可以利用母體血液作為產(chǎn)前診斷胎兒疾病的底物。受到腫瘤病人血漿中存在腫瘤DNA的啟發(fā)，Lo等(1997年)開始在母體血漿和血清中尋找胎兒DNA，他們用普通PCR的方法，在懷有男性胎兒的孕婦血漿和血清DNA中擴增出特異性Y染色體DNA序列，首次證實了孕婦血漿和血清中存在胎兒DNA，表明孕婦血漿和血清
3、是胎兒DNA和母體DNA的嵌合性混合物，提示孕婦血漿中的DNA是進行非侵入性產(chǎn)前診斷的另一種有價值的底物。1998年Lo用實時定量PCR技術(shù)通過檢測孕婦血清和血漿中性別決定Y(sex_detenniningregion，SRY)基因，測定了胎兒DNA的濃度，發(fā)現(xiàn)胎兒DNA的絕對濃度隨孕齡而增高，并在妊娠期末急劇升高，而且在孕7周就可以在母體血漿中檢測到胎兒DNA。通過對分娩后的孕婦進行研究，發(fā)現(xiàn)胎兒DNA從母體血漿中清除的半衰期平均約為16．3分鐘，腎臟可能在血漿清除中起作用。目前有幾種可能的機制解釋母體血漿中胎兒DNA的來源：
4、一種機制是，胎兒細胞碩士掌位論文檢測孕婦血漿中胎兒DNA在產(chǎn)前診斷的初步研究中文摘要穿過胎盤屏障不斷的漏出到母體血液循環(huán)中，同時被母體的免疫系統(tǒng)破壞，釋放出DNA留在母體血漿中。另一種機制是，在胎兒的發(fā)育過程中，存在與發(fā)育相關(guān)的程序性死亡即凋亡，胎兒細胞的凋亡導致胎兒細胞不斷裂解，將DNA釋放到母體血漿中。凋亡的啟動過程可自發(fā)啟動或受到外界刺激引發(fā)凋亡的啟動。分離母體血漿和血清中胎兒DNA的主要應(yīng)用于以下幾方面：l、遺傳性疾病(性連鎖遺傳病、父系遺傳病、唐氏綜合征)2、R_h(D)血型不合溶血3、妊娠相關(guān)性疾病。綜上所述，利用孕
5、婦血漿中的胎兒DNA進行產(chǎn)前診斷，為非創(chuàng)傷性產(chǎn)前診斷開辟了新的道路，有非常重要的臨床意義。本研究的目的在于研究如何檢測母體血漿中胎兒DNA，在孕早期做出產(chǎn)前胎兒性別診斷，并進一步探討不同孕周的正常孕婦其血漿中胎兒DNA的量和濃度是如何變化的，為將來應(yīng)用于非創(chuàng)性產(chǎn)前診斷作初步研究。本研究分兩部分，第一部分用定性檢測母體血漿中的胎兒DNA，證實母體血漿中存在胎兒DNA，可以在早孕期做出性別診斷。第二部分是用定量檢測母體血漿中的胎兒DNA，通過SRY基因的檢測，測定了不同孕周母體血漿中胎兒DNA及總DNA的量。第一部分：定性檢測母體血
6、漿中的胎兒DNA2002年3月1日至2002年6月30日在本院孕早期人流、孕中期行羊膜腔穿刺術(shù)作產(chǎn)前診斷、足月待產(chǎn)的初產(chǎn)婦共38例，在術(shù)前或末臨產(chǎn)前取肘前靜脈血10ml，乙二胺四乙酸鹽(ethylenedivinete脅ceficacid，EDTA)抗凝，經(jīng)離心分離血漿。用苯酚、氯仿、異戊醇提取血漿中DNA后，選擇Y染色體上的SRY基因，用巢式PCR擴增。用正常未孕女性和正常男性DNA分別作陰性對照和陽性對照。同時取人流術(shù)中吸出的絨毛作染色體培養(yǎng)、羊膜腔穿刺術(shù)抽取羊水作染色體培養(yǎng)以及出生胎兒的實際性別驗證結(jié)果。早孕組20例，經(jīng)巢
7、式PCR第1次擴增后，有7例出現(xiàn)351bp擴增帶為陽性，13例未出現(xiàn)擴增帶為陰性。這13例陰性樣本進行第2次擴增后有6例出現(xiàn)254bp擴增帶為陽性，7例未出現(xiàn)擴增帶為陰性。根據(jù)兩次擴增后結(jié)果判定懷有男性胎兒的孕婦為13例，懷有女性月fiJL的孕婦為7例。經(jīng)絨毛染色體驗證，13例判定懷有男性胎兒的孕婦中有12例絨毛染色體為46，xy，l例為46，xx；7例判定懷有女性胎兒的孕婦的絨毛染色體全部為46，XX，第1次擴增的陽性率為58．33％，無假陽性；第2次擴增的陽性率為100％，假陽性1例，陰性率為87．5％。中孕組6例，經(jīng)巢式P
8、CR第1次擴增后，有3例出現(xiàn)35lbp擴增帶為陽性，3例未出現(xiàn)擴增帶為陰性。這3例陰性樣本進行第2次擴增后有1例出現(xiàn)254bp擴增帶為陽性，一2一司E士掌位論文檢測孕婦血漿中胎兒DNA在產(chǎn)前診斷的初步研究中文摘要2例未出現(xiàn)擴增帶為陰性。根據(jù)兩次擴增后結(jié)果判定懷有
