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《人膽酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因的克隆、亞細(xì)胞定位及其在腎組織中的表達(dá)》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、維普資訊http://www.cqvip.com中國病理生理雜志ChineseJournalofPathophysiology2008，24(2)：335—339·335·[文章編號(hào)]1000—4718(2008)02—0335—05人膽酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因的克隆、亞細(xì)胞定位及其在腎組織中的表達(dá)白雪源，馬玉香，羅成華，師鎖柱，侯剴，馮哲，傅博，陳香美(解放軍總醫(yī)院’全軍腎臟病研究所暨腎病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，普外科，北京100853；青海大學(xué)附屬醫(yī)院腎內(nèi)科，青海西寧810001)[摘要]目的：克隆人腎與小腸ASBT(頂端Na／膽汁酸協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白)基因并比較2者的序列差別，明確ASBT蛋
2、白在腎小管上皮的亞細(xì)胞定位及在人腎組織中的表達(dá)情況。方法：從人腎和小腸組織中提取總RNA，然后用帶有8肽FLAG標(biāo)簽的PCR引物通過RT—PCR技術(shù)擴(kuò)增ASBT全長(zhǎng)cDNA基因并測(cè)序，并將其插入真核表達(dá)載體中構(gòu)建ASBT蛋白真核表達(dá)載體，然后將其轉(zhuǎn)染到腎小管上皮細(xì)胞LLC—PKI中表達(dá)并用免疫熒光一激光共聚焦顯微鏡觀察該蛋白的亞細(xì)胞定位情況。用免疫組化技術(shù)觀察ASBT在人腎組織中的表達(dá)分布。結(jié)果：序列分析結(jié)果表明腎小管ASBT基因的序列與小腸ASBT序列完全～致。Westernblotting表明ASBT基因在LLC—PKI細(xì)胞中得到了正確的表達(dá)。共聚焦顯微鏡分析顯示正
3、常ASBT蛋白主要定位于腎小管上皮細(xì)胞膜上，與生物信息學(xué)的預(yù)測(cè)結(jié)果一致。免疫組化染色表明ASBT蛋白主要表達(dá)于人近端腎小管上皮的刷狀緣側(cè)，在間質(zhì)及遠(yuǎn)端小管沒有表達(dá)。結(jié)論：人腎小管ASBT基因序列與小腸ASBT相同，ASBT蛋白主要表達(dá)于近端腎小管上皮細(xì)胞管腔側(cè)細(xì)胞膜。[關(guān)鍵詞]膽汁酸類；腎小管；亞細(xì)胞定位；載體蛋白質(zhì)類[中圖分類號(hào)]0493．8，Q735[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]AGenecloning，subcellularlocalizationandexpressioninkidneytissueofhumanASBTproteinBAIXue—yuan，MAYu—xiang
4、。，LUOCheng—hua，SHISuo—zhu，HOUKai，F(xiàn)ENGZhe．FUBo．CHENXiang—mel(ChinesePLAInstituteofNephrology，DepartmentofGeneralSurgery，ChinesePLAGeneralHospital&MilitaryPostgrad-uateMedicalCollege，Beijing100853，China；DepartmentofNephrology，TheAffiliatedHospitalofQinghaiUniversity，Xining810001，China．E—ma
5、il：xmchen@public．bto．net．ca)[ABSTRACT]AIM：TocomparethecDNAsequencesofASBT(apicalNa／bileacidcotransporter)geneclonedfromhumankidneyandintestinetissues，andtodeterminesubcellularlocalizationofASBTinrenaltubularepithelialcellsandexpressionsiteofASBTinhumankidneytissue．METHODS：ThetotalRNAwase
6、xtractedfromhumankidneyandin—testinetissues．Thefull—lengthcDNAgeneofASBTwasamplifiedbyRT—PCRtechniqueusingprimerswith8一peptideFLAGtag，sequencedandinsertedintoeukaryoticexpressionvectortoconstructASBTproteinexpressionvector，whichwasthentransfectedintoswinerenaltubularepithelialcelllineLLC
7、—PKI．ThesubcellularlocalizationofASBTproteinwasdeterminedbyimmunofluorescencestainingandlaserconfocalmicroscope．Immunohistochemicalanalysiswasusedtoob—serveexpressionpositionofASBTinkidneytissue．RESULTS：TheresultsrevealedthatthesequenceofkidneyASBTcD—NAgenewasidenticaltot
