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《小鼠腹膜纖維化相關(guān)的LncRNA的初步篩選及功能分析》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、分類號(hào)：R5學(xué)校代碼：10062密級(jí)：學(xué)號(hào)：2014701027博士學(xué)位論文DOCTORALDISSERTATION論文題目：小鼠腹膜纖維化相關(guān)的LncRNA的初步篩選及功能分析TITLEThePreliminaryScreeningandFunctionAnalysisofLncRNARelatedwithMousePeritonealFibrosis一級(jí)學(xué)科：臨床醫(yī)學(xué)二級(jí)學(xué)科：內(nèi)科學(xué)腎病論文作者:王玉潯導(dǎo)師：姜埃利天津醫(yī)科大學(xué)研究生院二O一七年九月分類號(hào)：R5學(xué)校代碼：10062密級(jí)：學(xué)號(hào)：201
2、4701027學(xué)位類別：科學(xué)學(xué)位?專業(yè)學(xué)位?學(xué)科門(mén)類：醫(yī)學(xué)博士學(xué)位論文DOCTORALDISSERTATION論文題目：小鼠腹膜纖維化相關(guān)的LncRNA的初步篩選及功能分析TITLEThePreliminaryScreeningandFunctionAnalysisofLncRNARelatedwithMousePeritonealFibrosis一級(jí)學(xué)科：臨床醫(yī)學(xué)二級(jí)學(xué)科：內(nèi)科學(xué)腎病論文作者：王玉潯導(dǎo)師：姜埃利教授導(dǎo)師組成員：馮福民教授史國(guó)輝教授天津醫(yī)科大學(xué)研究生院二O一七年九月天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位
3、論文I天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文中文摘要目的：探討在腹膜透析液誘導(dǎo)小鼠腹膜纖維化過(guò)程中，長(zhǎng)鏈非編碼RNA(lncRNA)表達(dá)譜的變化，以及差異表達(dá)的長(zhǎng)鏈非編碼RNA的初步功能研究。利用高通量的微陣列基因芯片技術(shù)，探索長(zhǎng)鏈非編碼RNA在腹膜透析液誘導(dǎo)的小鼠腹膜纖維化動(dòng)物模型中的表達(dá)差異。篩選異常表達(dá)的lncRNA、mRNA，并建立異常表達(dá)的lncRNA表達(dá)譜。進(jìn)行芯片結(jié)果的PCR驗(yàn)證。對(duì)差異表達(dá)的基因進(jìn)行初步生物信息學(xué)研究。從基因組學(xué)層面上，解釋腹膜透析所導(dǎo)致的腹膜纖維化的機(jī)理，為以后臨床試驗(yàn)的開(kāi)展奠定實(shí)
4、驗(yàn)基礎(chǔ)。方法：選取6周齡C57/BL雄性小鼠，分為對(duì)照組、早期腹膜纖維化組（造模4周）、進(jìn)展期腹膜纖維化組（造模6周），各組10只。模型組：每日腹腔注射含葡萄糖濃度為4.25%的腹膜透析液1次，注射劑量：1mL/10g體重。建立腹膜纖維化的早期及進(jìn)展期小鼠模型。實(shí)驗(yàn)周期完成后，分別對(duì)各組小鼠的腹膜透析超濾量及流出液蛋白濃度進(jìn)行檢測(cè)；分別留取三組小鼠的眶靜脈血、腹膜透析流出液進(jìn)行送檢，檢測(cè)小鼠靜脈血和腹膜透析流出液中尿素及葡萄糖濃度，計(jì)算兩種物質(zhì)的清除率；分別留取三組小鼠的壁層腹膜組織，行HE染色、Ma
5、sson染色，觀察腹膜形態(tài)學(xué)的改變；留取小鼠的臟層腹膜組織，提取、純化臟層腹膜組織的總RNA，合成cRNA，制備基因芯片，進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。將對(duì)照組及早期腹膜纖維化組、進(jìn)展期腹膜纖維化組分別進(jìn)行兩組間比較，得出差異變化的lncRNA、mRNA的表達(dá)譜。選取差異表達(dá)上調(diào)及下調(diào)倍數(shù)較高，且符合篩選標(biāo)準(zhǔn)的數(shù)個(gè)IncRNAs進(jìn)行實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(quantitativereal-timepolymerasechainreaction,qRT-PCR)檢測(cè)，對(duì)基因芯片結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。對(duì)差異表達(dá)的mRNAs進(jìn)行G
6、O分析，獲得參與腹膜纖維化過(guò)程中差異表達(dá)的mRNA的生物學(xué)信息，與具體基因聯(lián)系起來(lái)，對(duì)其功能進(jìn)行描述。查詢檢索KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)，從中獲得差異表達(dá)的mRNAs參與的信號(hào)通路注釋，進(jìn)一步闡述這些基因的作用機(jī)制。結(jié)果：（1）與對(duì)照組相比，早期腹膜纖維化組及進(jìn)展期腹膜纖維化組腹膜透析超流量均有所減少（P＜0.05），進(jìn)展期腹膜纖維化組與早期腹膜纖維化組比較，腹膜透析超流量明顯減少，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。與對(duì)照組比較，兩模型組腹膜透析流出液中引流蛋白濃度增加，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）；兩模型組間比較，
7、腹膜透析流出液中引流蛋白濃度無(wú)顯著差異（P＞0.05）。II天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文（2）檢驗(yàn)三組小鼠靜脈血和腹膜透析流出液中尿素及葡萄糖濃度，計(jì)算兩種物質(zhì)的清除率。與對(duì)照組比較，早期腹膜纖維化組及進(jìn)展期腹膜纖維化組的尿素、葡萄糖清除率下降，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）；兩模型組間比較，進(jìn)展期腹膜纖維化組尿素、葡萄糖清除率較早期腹膜纖維化組均有所下降，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。（3）光鏡下觀察小鼠腹膜組織形態(tài)學(xué)特征，兩模型組的腹膜結(jié)構(gòu)均發(fā)生了改變，腹膜組織增厚，部分腹膜間皮細(xì)胞變形、間皮細(xì)胞間連接
8、消失、間皮細(xì)胞下纖維組織增生，間質(zhì)間炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，且隨著腹膜纖維化發(fā)生的進(jìn)展，上述改變逐漸顯著。（4）高通量微陣列芯片技術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示，兩組腹膜纖維化小鼠模型IncRNAs的表達(dá)量與正常對(duì)照組分別進(jìn)行比較，差異表達(dá)2倍及以上。選取兩模型組與正常組比較結(jié)果為同向性改變的lncRNAs及mRNAs。lncRNA篩選結(jié)果：與正常對(duì)照組的比較，早期模型組中差異表達(dá)的lncRNA有857個(gè)，其中表達(dá)上調(diào)的lncRNA有341個(gè)，表達(dá)下調(diào)的lncRNA有516個(gè)；進(jìn)
