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1、碩士學(xué)位論文蠐螬抗菌肽PLGA微球的制備及其抗菌性能的研究作者姓名王成學(xué)科專業(yè)食品科學(xué)與工程指導(dǎo)教師余以剛教授所在學(xué)院食品科學(xué)與工程論文提交日期2018年04月PreparationofGrubAntimicrobialPeptideMicroparticlesandReseachonItsAntimicrobialPropertiesADissertationSubmittedfortheDegreeofMasterCandidate：ChengWangSupervisor：Prof.YigangYuSouthChinaUniversityofTec
2、hnologyGuangzhou,China分類(lèi)號(hào)：學(xué)校代號(hào)：10561學(xué)號(hào)：201520120920華南理工大學(xué)碩士學(xué)位論文蠐螬抗菌肽PLGA微球的制備及其抗菌性能的研究作者姓名：王成指導(dǎo)教師姓名、職稱：余以剛教授申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士學(xué)科專業(yè)名稱：食品科學(xué)與工程研究方向：食品質(zhì)量與安全論文提交日期：2018年04月20日論文答辯日期：2018年06月06日學(xué)位授予單位：華南理工大學(xué)學(xué)位授予日期：年月日答辯委員會(huì)成員：主席：成委員：摘要使用胰蛋白酶酶解蠐螬蛋白制備出對(duì)大腸桿菌（革蘭氏陰性菌）和金黃色葡萄球菌（革蘭氏陽(yáng)性菌）都有抑菌活性的小分子抗菌肽。以加
3、酶量，酶解時(shí)間，料液比和酶解pH為因素，用單因素分析法和四因素四水平正交實(shí)驗(yàn)法確定了胰蛋白酶酶解蠐螬蛋白制備抗菌肽的最佳實(shí)驗(yàn)條件。結(jié)果表明：當(dāng)加酶量為50.0ku/g，酶解時(shí)間為90min，料液比為1:10(g/mL)和酶解pH為7.5時(shí)，制備得到的酶解產(chǎn)物對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑制作用最強(qiáng)，抑菌圈直徑分別為8.7mm和11.5mm。通過(guò)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂對(duì)酶解產(chǎn)物進(jìn)行初步純化，以大腸桿菌和金黃色葡萄球菌為指示菌，研究了純化得到的抗菌肽組分的環(huán)境穩(wěn)定性。結(jié)果表明：陽(yáng)離子交換色譜分離出5個(gè)組分，其中第三個(gè)吸收峰（GPP3）對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑
4、制效果最好，抑菌圈直徑分別為13.7mm和17.2mm。純化得到的蠐螬抗菌肽在環(huán)境pH為6.0時(shí)，抑菌活性最好；抗菌肽具有極好的溫度穩(wěn)定性，處理溫度為100°C時(shí)，仍具有良好的抗菌活性；當(dāng)環(huán)境中鹽濃度超過(guò)80.0mmol/L時(shí)，抑菌活性開(kāi)始下降；純化得到的抗菌肽具有良好的耐胰蛋白酶水解活性，但不具備耐胃蛋白酶水解活性。以聚乳酸羥基乙酸聚合物為多肽載體，以多肽包封率為主要指標(biāo)，研究了內(nèi)水相中多肽濃度，有機(jī)相聚乳酸羥基乙酸聚合物濃度，內(nèi)水相與有機(jī)相體積和比例對(duì)包封率的影響。研究表明：當(dāng)多肽濃度為2.5mg/mL，聚合物濃度為2.5mg/mL，內(nèi)水相和有機(jī)相
5、體積分別為4.0mL和2.0mL時(shí)，制備得到的PLGA微球多肽包封率最高為79.80%；此時(shí)，PLGA微球粒徑為1.5μm，多肽載藥量為10.83%。研究了PLGA微球在不同模擬液中的體外釋放過(guò)程、耐胃蛋白酶水解能力和細(xì)菌細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整性的影響等。結(jié)果表明：抗菌肽PLGA微球在水中的釋放情況符合Higuchi方程所代表的動(dòng)力學(xué)規(guī)律，在模擬胃液中的釋放情況符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程所代表的動(dòng)力學(xué)規(guī)律；制備的PLGA微球具有良好的耐胃蛋白酶水解能力；掃描電鏡圖顯示，抗菌肽PLGA微球能使大腸桿菌細(xì)胞膜破裂；抗菌肽PLGA微球?qū)瘘S色葡萄球菌的細(xì)胞膜整體結(jié)構(gòu)沒(méi)有明顯的
6、影響，可能是抗菌肽以“毯式模型”作用于細(xì)胞膜，進(jìn)入到細(xì)胞中，影響細(xì)胞代謝系統(tǒng)而產(chǎn)生抑菌作用的。關(guān)鍵詞：蠐螬；抗菌肽；PLGA微球；抗菌活性IAbstractInthispaper,grubproteinwashydrolyzedbytrypsintopreparesmall-moleculeantimicrobialpeptideswithinhibitoryactivityagainstStaphylococcusaureus(Gram-positivebacteria)andEscherichiacoli(Gram-negativebacteria
7、).Theoptimumconditionsforthepreparationofantimicrobialpeptidesbytrypsindigestionweredeterminedbysinglefactoranalysisandorthogonalexperimentwithfourfactorsandfourlevels.Theresultsshowedthattheoptimalconditionswasenzymedosage50.0ku/g,enzymolysistime90min,solid-liquidratio1:10(g/mL
8、)andpH7.5,undertheseconditions,thehydrolyzatesh
