5-HT誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞自噬及其機(jī)制的初步研究

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1、分類(lèi)號(hào)：S859.1單位代碼：10183研究生學(xué)號(hào)：2015852040密級(jí)：公開(kāi)研5-HT誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞自吉林大學(xué)噬及其碩士學(xué)位論文機(jī)制的（學(xué)術(shù)學(xué)位）初步5-HT誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞自噬及其機(jī)制的初步研究研究5-HT-inducedHepatomaCellAutophagyandItsMechanisms作者姓名：李樹(shù)林李樹(shù)專(zhuān)業(yè)：獸醫(yī)公共衛(wèi)生林研究方向：人獸共患病吉指導(dǎo)教師：于錄教授林大培養(yǎng)單位：動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院學(xué)2018年6月5-HT誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞自噬及其機(jī)制的初步研究5-HT-inducedHepatomaCellAutophagyand

2、ItsMechanisms本研究由吉林省科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目、吉林省教育廳項(xiàng)目和深圳市科學(xué)技術(shù)創(chuàng)新委員會(huì)項(xiàng)目資助（項(xiàng)目編號(hào)：）No.20150101108JC、No.2016444和No.JSGG20160301100442775TheresearchwassupportedbyJilinProvinceScienceandTechnologyDevelopmentPlanProject,JilinProvincialDepartmentofEducationProjectandShenzhenScienceandTechnolog

3、yInnovationCommitteeProjectFoundationofChina（No.）No.20150101108JC、No.2016444和No.JSGG20160301100442775作者姓名：李樹(shù)林專(zhuān)業(yè)名稱(chēng)：獸醫(yī)公共衛(wèi)生指導(dǎo)教師：于錄教授學(xué)位類(lèi)別：農(nóng)學(xué)碩士答辯日期：2018年6月7日中文摘要5-HT誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞自噬及其機(jī)制的初步研究自噬是真核生物中高度保守的細(xì)胞內(nèi)降解途徑，是一個(gè)對(duì)大多數(shù)細(xì)胞至關(guān)重要的分解代謝過(guò)程，它對(duì)通過(guò)循環(huán)細(xì)胞質(zhì)成分在應(yīng)激條件下維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài)和細(xì)胞存活起到至關(guān)重要的作用。自噬是細(xì)胞內(nèi)最重要的

4、蛋白質(zhì)降解途徑之一，可以促進(jìn)消除大部分的異常蛋白質(zhì)、多余或損傷的細(xì)胞器乃至整個(gè)生物體。巨自噬、微自噬和分子伴侶介導(dǎo)的自噬是自噬最基本的三種類(lèi)型。它們發(fā)生的機(jī)制和功能是不同的。我們目前所說(shuō)的自噬是巨自噬，它以能夠形成稱(chēng)為自噬體的雙層膜囊泡為最顯著的特征。能夠誘導(dǎo)自噬的因素有很多，例如化學(xué)藥物雷帕霉素、缺氧和營(yíng)養(yǎng)饑餓等。與酵母細(xì)胞中的自噬相比，哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的自噬是一個(gè)異常復(fù)雜的生理過(guò)程，涉及抗原遞呈、病原清除、細(xì)胞應(yīng)激、生存、衰老和死亡等過(guò)程?，F(xiàn)代研究表明，自噬與包括自身免疫性疾病、肌營(yíng)養(yǎng)性疾病、帕金森病、心血管疾病、衰老和癌癥等

5、多種疾病的發(fā)病機(jī)制有關(guān)。雖然自噬與這些疾病的關(guān)系還沒(méi)有研究透徹，但是自噬作為治療多種疾病的靶標(biāo)已成為當(dāng)前的研究熱點(diǎn)。5-羥色胺（5-hydroxytryptamine，5-HT）是人體中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的一種單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)、腸道中的局部介質(zhì)和血液中的血管活性劑。色氨酸、鎂、鋅和脂肪酸等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)參與5-HT的合成。5-HT能夠影響人的情緒、睡眠和食欲等。人體內(nèi)的5-HT通過(guò)與相應(yīng)的受體特異性結(jié)合從而發(fā)揮作用，目前已有7種5-HT受體亞型被發(fā)現(xiàn)。已有研究表明，5-HT通過(guò)5-HT1和5-HT2受體在侵襲性癌癥和類(lèi)癌中表現(xiàn)出生長(zhǎng)刺激作用。

6、選擇性5-HT轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抑制劑、5-HT受體拮抗劑和5-HT合成抑制劑已成功用于預(yù)防癌細(xì)胞生長(zhǎng)等方面。另有研究表明，ROS能夠誘導(dǎo)癌細(xì)胞自噬[1]，且ROS在癌癥的發(fā)生、轉(zhuǎn)移等方面發(fā)揮著非常重要的作用?；谧允?、ROS和5-HT均與癌癥的密切聯(lián)系，5-HT能否誘導(dǎo)癌細(xì)胞自噬已經(jīng)成為一個(gè)值得研究的問(wèn)題。本文以HepG2和Hep3B細(xì)胞為模式細(xì)胞，對(duì)5-HT能否誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞自噬及可能的機(jī)制進(jìn)行初步研究。首先，我們建立了帶有GFP-LC3質(zhì)粒的HepG2和Hep3B細(xì)胞系，用不同I濃度的5-HT處理不同時(shí)間后，在熒光顯微鏡下觀察HepG

7、2和Hep3B細(xì)胞的GFP-LC3熒光斑點(diǎn)；利用westernblot技術(shù)檢測(cè)HepG2和Hep3B細(xì)胞中自噬標(biāo)志蛋白LC3和p62的表達(dá)情況。結(jié)果顯示，5-HT均能夠誘導(dǎo)HepG2和Hep3B細(xì)胞內(nèi)GFP-LC3斑點(diǎn)增多，而且我們明確了5-HT對(duì)自噬的最佳誘導(dǎo)濃度和最佳誘導(dǎo)時(shí)間；5-HT能夠顯著增強(qiáng)HepG2和Hep3B細(xì)胞中LC3蛋白的表達(dá)量和p62蛋白的降解。其次，我們用westernblot技術(shù)檢測(cè)了不同濃度的5-HT處理不同時(shí)間后HepG2和Hep3B細(xì)胞內(nèi)自噬相關(guān)蛋白mTOR、4E-BP1、p70S6K、AMPKα、

8、AMPKβ、ERK、p38、JNK、ULK1蛋白的磷酸化水平。利用westernblot分析了用PD98059（ERK抑制劑）、SP600125（JNK抑制劑）和SB203580（p38抑制劑）預(yù)處理，5-HT處理后HepG2和Hep3B細(xì)胞內(nèi)的ERK、JNK和