腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子對小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞增殖和睪酮分泌的影響

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1、分類號：S814.1單位代碼：10183研究生學(xué)號：2015882017密級：公開腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子對小鼠吉林大學(xué)睪丸間質(zhì)碩士學(xué)位論文細(xì)胞睪（學(xué)術(shù)學(xué)位）酮分泌腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子對小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞增殖和睪酮分泌的影響的影響究Theeffectsofbrain-derivedneurotrophicfactoronproliferationandsteriodogenesisofmouseLeydigcells作者姓名：高珊專業(yè)：動物遺傳育種與繁殖研究方向：動物生殖調(diào)控吉指導(dǎo)教師：李純錦教授林大學(xué)培養(yǎng)單位：動物科學(xué)學(xué)院吉林大者2018年6月學(xué)

2、姓名作腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子對小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞增殖和睪酮分泌的影響Theeffectsofbrain-derivedneurotrophicfactoronproliferationandsteriodogenesisofmouseLeydigcells作者姓名：高珊專業(yè)名稱：動物遺傳育種與繁殖指導(dǎo)教師：李純錦教授學(xué)位類別：農(nóng)學(xué)碩士答辯日期：2018年6月5日中文摘要腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子對小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞增殖和睪酮分泌的影響腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子的在中樞神經(jīng)系統(tǒng)和周圍神經(jīng)系統(tǒng)的作用最先被人們廣泛地認(rèn)知，而其在哺乳動物其他組織器官的作用和功能還有待于

3、進(jìn)一步的探索。而關(guān)于BDNF對雄性生殖生理的影響的研究卻十分有限，特別是BDNF對雄性睪酮合成的影響還未見報道。本試驗(yàn)?zāi)康脑谟谔剿鰾DNF是否對雄性動物睪丸中類固醇激素的合成存在調(diào)節(jié)的作用，若存在調(diào)節(jié)作用，并試圖進(jìn)一步闡明其內(nèi)在的機(jī)理。我們的研究發(fā)現(xiàn)，添加外源的BDNF能夠上調(diào)類固醇激素合成相關(guān)的基因的表達(dá)，從而促進(jìn)類固醇激素的合成，這些基因主要包括SteroidogenicacuteregμLatoryprotein(Star)，3b-hydroxysteroiddehydrogenase(Hsd3b1)和CytochromeP450s

4、ide-chaincleavageenzyme(Cyp11a1)。結(jié)果顯示，處理之后上清中的睪酮的含量顯著地升高（p<0.05），而Star，Hsd3b1，Cyp11a1的mRNA水平顯著升高（p<0.05），Star和Cyp11a1蛋白的水平顯著升高（p<0.05）。為了進(jìn)一步印證BDNF的作用，本試驗(yàn)用RNA干擾的方法，瞬時地將內(nèi)源的BDNF基因進(jìn)行敲降，發(fā)現(xiàn)BDNF敲降之后，首先顯著地降低上清中的睪酮的分泌水平（p<0.05），其次，顯著地降低了類固醇激素合成相關(guān)基因的表達(dá)，結(jié)果顯示：BDNF，Star，Hsd3b1，Cyp11a1

5、的mRNA水平顯著性降低（p<0.05），Star以及Cyp11a1蛋白的水平也顯著性降低（p<0.05）。為了闡明BDNF對類固醇激素合成調(diào)控的作用機(jī)理，我們在外源的BDNF處理和干擾掉內(nèi)源的BDNF基因之后，均分別檢測了MEK-ERK1/2通路的磷酸化的水平變化，通過westernboltting技術(shù)檢測了關(guān)鍵蛋白ERK1/2的磷酸化水平，結(jié)果顯示，BDNF蛋白處理24小時之后，ERK1/2的磷酸化水平顯著地上升（p<0.05）。而干擾掉內(nèi)源的BDNF基因之后，ERK1/2的磷酸化水平又顯著地下降（p<0.05）。為了進(jìn)一步印證MEK

6、-ERK1/2通路的激活狀態(tài)，我們用MEK通路特異性阻斷劑PD98059處理了TM3細(xì)胞，結(jié)果表明，處理之后，首先ERK1/2的磷酸化水I平顯著地下降（p<0.05），而上清中的睪酮含量顯著地降低（p<0.05）。其次，Star，Hsd3b1，Cyp11a1的mRNA水平顯著性降低（p<0.05），而Star和Cyp11a1蛋白的水平也顯著性降低（p<0.05）。添加外源的BDNF蛋白的試驗(yàn)中，證明BDNF有促進(jìn)睪丸間質(zhì)細(xì)胞睪酮合成的作用，而敲降內(nèi)源的BDNF基因的試驗(yàn)證明，BDNF能夠作為一種旁分泌因子對睪酮的合成進(jìn)行調(diào)節(jié)。而ERK1/

7、2通路是參與BDNF發(fā)揮其調(diào)節(jié)作用的一條通路。關(guān)鍵詞：腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子，睪丸間質(zhì)細(xì)胞，睪酮，ERK1/2信號通IIAbstractTheeffectsofbrain-derivedneurotrophicfactoronproliferationandsteriodogenesisofmouseLeydigcellsBrain-derivedneurotrophicfactor(BDNF)wasfirstrecognizedforitsrolesintheperipheralandcentralnervoussystems,andits

8、complexfunctionsonmammalianorganshavebeenextendedconstantly.While,asyet,littleisknownaboutBDNFef