資源描述：
《神經(jīng)生長(zhǎng)因子和腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞遷移的影響.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、·26·黑龍江醫(yī)藥科學(xué)2015年6月第38卷第3期神經(jīng)生長(zhǎng)因子和腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞遷移的影響①魏春杰，江清林，朱曉峰(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院神經(jīng)三科，黑龍江佳木斯154003)摘要：目的：探討神經(jīng)生長(zhǎng)因子(nervegrowthfactor，NGF)與腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(brain—derivedneurotrophicfactor，BD—NF)體外實(shí)驗(yàn)對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞遷移的影響。方法：體外應(yīng)用半固體培養(yǎng)法連續(xù)14d觀察不同濃度的NGF、BDNF及NGF+BDNF組合誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞遷移的情況。結(jié)果：體外條件下
2、不同濃度的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的組間和組內(nèi)比較顯示，lO0~g／LBDNF誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞遷移作用最明顯。BDNF+NGF聯(lián)合組在誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞遷移方面未見(jiàn)協(xié)同效應(yīng)。結(jié)論：NGF、BDNF二者皆有誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞遷移的作用，lO01~g／LBDNF組誘導(dǎo)遷移作用最明顯。關(guān)鍵詞：神經(jīng)生長(zhǎng)因子；腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子；神經(jīng)干細(xì)胞；遷移中圖分類號(hào)：R329．23文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1008—0104(2015)03—0026—02神經(jīng)干細(xì)胞是神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)問(wèn)題，態(tài)學(xué)變化J。它的發(fā)現(xiàn)為神經(jīng)系統(tǒng)疾病治療開拓了新的前②分組：BDNF
3、：濃度1g／L、lO~g／L、lO01xg／L，景】’2J。其增殖、定向誘導(dǎo)分化研究方面都取得了共3組。NGF：濃度1g／L、lOp~g／L、lOOp~g／L，共3一定的成績(jī)，但針對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞遷移方面的研究較組。BDNF+NGF：從上述6組中篩選出兩種因子的少。本實(shí)驗(yàn)在體外條件下探討不同濃度的NGF、最佳濃度組成1組?？瞻讓?duì)照組：不加任何NrF。BDNF及其組合誘導(dǎo)NSCs遷移中的作用，并對(duì)兩種免疫細(xì)胞組織化學(xué)及熒光實(shí)驗(yàn)：nestin標(biāo)記：將因子及組合進(jìn)行擇優(yōu)，選出最佳濃度的因子，為下一傳代三次后的細(xì)胞團(tuán)貼壁培養(yǎng)48
4、h后進(jìn)行nestin免步體內(nèi)實(shí)驗(yàn)奠定基礎(chǔ)。疫細(xì)胞化學(xué)鑒定。數(shù)碼照相機(jī)拍照，各組均設(shè)陰性1·材料和方法對(duì)照，陰性對(duì)照切片以PBS替代一抗，其余步驟相1．1材料同。Wistar新生鼠，由本校動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。主1．3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法要試劑：DMEM／F12、B27、熒光FITC標(biāo)記試劑，DAB采用SPSSIO．0軟件，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差顯色試劑，BrdU、NSE、nestin、GFAP一抗，SABC—(±s)表示，多組之間兩兩比較用方差分析，兩組FITC、SABC—CY3，EGF、bFGF、BDNF因子，羊抗小之間比較用t
5、檢驗(yàn)，P<0．05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。鼠Cy3，低熔點(diǎn)瓊脂糖。2結(jié)果1．2方法神經(jīng)干細(xì)胞球貼壁培養(yǎng)后24h，作Nestin免疫神經(jīng)干細(xì)胞的分離及培養(yǎng)：選用Wistar新生鼠，熒光鑒定絕大部分細(xì)胞顯示nestin陽(yáng)性細(xì)胞團(tuán)呈綠取海馬組織，經(jīng)D—Hanks，液漂洗后將腦組織置入色，遷出分化的NSCs呈陰性(見(jiàn)圖1)。連續(xù)14d觀小瓶中剪碎，加人無(wú)血清培養(yǎng)基吹打成單細(xì)胞懸液，察接種在培養(yǎng)皿上的神經(jīng)干細(xì)胞，見(jiàn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)臺(tái)盼蘭染色計(jì)數(shù)，于每個(gè)培養(yǎng)瓶中加入密度約為5良好，倒置顯微鏡下細(xì)胞折光性強(qiáng)(見(jiàn)圖2)。Br×10／mL細(xì)胞懸液
6、4mL左右。置于37oC、5％CO，dU標(biāo)記移植前之神經(jīng)干細(xì)胞，免疫組化見(jiàn)大量神經(jīng)飽和濕度孵育箱內(nèi)培養(yǎng)。待原代克隆形成后再次分離制作單細(xì)胞懸液，此后每隔3d半量換液，5～7d細(xì)胞呈胞核被染色而胞漿未被染色Brdu標(biāo)記陽(yáng)性分離神經(jīng)球進(jìn)行傳代J。細(xì)胞，少部分未被標(biāo)記。(見(jiàn)圖3)。鏡下見(jiàn)BDNF半固體培養(yǎng)：①取蓋玻片置于3．5cm培養(yǎng)皿底各組神經(jīng)元樣細(xì)胞多，胞體面積大，突起長(zhǎng)，14d時(shí)部，基本培養(yǎng)液為含0．3％低熔點(diǎn)瓊脂和2％B27的胞體多呈現(xiàn)三角行或多邊形，分支豐富。NGF各組DMEM／F12(撤走bFGF)。在蓋玻片上
7、用5％的瓊細(xì)胞呈現(xiàn)類圓形或類星形，胞體較大，細(xì)胞伸出較多脂和神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(neurotrophicfactor，NTF)制成突起并逐漸延長(zhǎng)，突起末端分支可見(jiàn)膨大的生長(zhǎng)錐。NTF擴(kuò)散源，將傳代三代后得神經(jīng)干細(xì)胞分散放置鏡下觀察見(jiàn)BDNF組及NGF組細(xì)胞遷出均有方向于NTF擴(kuò)散源周圍的蓋玻片上，培養(yǎng)于基本培養(yǎng)液性趨勢(shì)，但不同濃度的因子誘導(dǎo)NSCs遷移現(xiàn)象是中，觀察不同因子不同濃度制成的擴(kuò)散源誘導(dǎo)NSCs有差別的。高濃度組中細(xì)胞團(tuán)細(xì)胞向培養(yǎng)皿中心即遷移情況，并跟蹤觀察各組實(shí)驗(yàn)細(xì)胞遷移行為及形因子擴(kuò)散源方向遷出趨勢(shì)明顯，向這
8、一個(gè)方向伸出①基金項(xiàng)目：黑龍江省教育廳資助項(xiàng)目，編號(hào)：12521543。作者簡(jiǎn)介：魏春杰(1980～)女，黑龍江佳木斯人，碩士，主治醫(yī)師。通訊作者：朱曉峰(1963～)男，山東蓬萊人，博士，教授，博士研究生導(dǎo)師。E—mail：sjkx2727@163．tom。HEILOI~『GJIANGMEDICINEANDPHARMACYJun．2015．V
