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《菜心非特異性脂轉(zhuǎn)移蛋白基因（nsLTP）的克隆、表達(dá)與功能》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、暨南大學(xué)碩士學(xué)位論文題名（中英對照）：菜心非特異性脂轉(zhuǎn)移蛋白基因ＵｓＬＴＰ）的克隆、表達(dá)與功能分析ｓｓ－Ｃｌｏｎｉｎｇ，ｅｘｐｒｅｉｏｎａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎａｎａｌｓｉｓｏｆｎｏｎｓｐｅｃｉｆｉｃＬｉｐｉｄｙＴｒａｎｓｆｅｒＰｒｏｔｅｉｎｇｅｎｅ（ｎｓＬＴＰ）ｉｎＣｈｉｎｅｓｅｆｌｏｗｅｒｉｎｇｃａｂｂａｇｅＢｒａｓｓｉｃａａｒａｃｈｉｎｅｎｓｉｓＬ．｛ｐ）作者姓名：黃何彪指導(dǎo)教師姓名及學(xué)位、職稱：莫測輝博士教授？學(xué)科．Ｉ學(xué)、環(huán)境工程、專業(yè)名稱論文提交日期：２０１８年５月
2、論文答辯日期：２０１８年６月答辯委員會主席：論文評閱人：學(xué)位授予單位和日期：獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研宄成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人己經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得暨南大學(xué)或其他教材料一同工作的同志對本研究所做的任育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的。與我｜何貢獻(xiàn)均表不謝急。己在論文中作了明確的說明并ｊ學(xué)位論文作者簽名簽字日期辦丨ｆ年Ｚ月滅曰｜學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解暨南大學(xué)有關(guān)保
3、留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)暨南大學(xué)可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以論文。密后適用本授權(quán)書）（保密的學(xué)位論文在解ｊ名：學(xué)位論文作者簽名：導(dǎo)師簽曰簽字日期：讀年“對曰：＞年６月％簽字曰期丨｜學(xué)位論文作者畢業(yè)后去向：電話：工作單位：丨＿：丨通訊地址：暨南大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要農(nóng)田土壤中鄰苯二甲酸酯（Ｐｈｔｈａｌｉｃａｃｉｄｅｓｔｅｒ，ＰＡＥｓ
4、）的污染狀況日趨嚴(yán)重，直接影響農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全，嚴(yán)重危害人體健康。課題組前期對篩選獲得的高／低累積ＰＡＥｓ菜心（＾Ｓｒａ＾／ｃａｐａｒａｃ／ｎＶｊｍｓ＾Ｌ）進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組和蛋白組學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)非特異性脂轉(zhuǎn)移蛋白（ｎｓＬＴＰ）基因在菜心高、低累積ＰＡＥｓ過程中差異表達(dá)十分顯著。因此，為探討ｎｓＬＴＰ菜心在高／低累積ＰＡＥｓ差異特性形成中的作用，本研究通過ＲＡＣＥ克隆獲得了菜心ｎｓＬＴＰ基因全長并對其進(jìn)行序列分析，采用原核表達(dá)，亞細(xì)胞定位和分子模擬等實驗手段研究其分子生理功能，為揭示不同基因型菜心高／低累積ＰＡＥｓ性狀形成的分子生物學(xué)
5、機(jī)制提供基礎(chǔ)。本論文取得的主要研究結(jié)果如下：（１）本研究以菜心轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)為基礎(chǔ)，經(jīng)過ＲＡＣＥ克隆獲得了菜心ｎｓＬＴＰ基因全長。該基因全長５８７ｂｐ，開放閱讀框（ＯＲＦ）長２９７ｂｐ。共編碼９７個氨基酸，蛋白分子量為１０．３６ＫＤａ，根據(jù)蛋白質(zhì)分子量分類，其屬于ｎｓＬＴＰＩ型蛋白（５ｒａ５＾ｄａｒａ／ｉ？）ｎｓＴＬＰ基。通過基因序列比對分析發(fā)現(xiàn)與油菜ｐ因同源性最高，同源性高達(dá)９７％，蛋白質(zhì)多重比對以及進(jìn)化樹分析發(fā)現(xiàn)，與憲菁（５ｒａ＾ｄａｒａｐａ）和油菜差異最小，與芥藍(lán)（ＣａｍｅＺ／ｗａｓａｒｉｖａ）差異最大一２
6、９。通過對蛋白氨基酸序列進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，該基因編碼的蛋白質(zhì)Ｎ端有段個氨基酸大小的信號肽，且具有與信號肽序列重疊的跨膜結(jié)構(gòu)，對應(yīng)的氨基酸序列疏水性明顯。對菜心ｎｓＬＴＰ蛋白二級結(jié)構(gòu)和三級結(jié)構(gòu)預(yù)測發(fā)現(xiàn)，ｎｓＬＴＰ基因編碼蛋白具有８個半胱氨酸組成４對二硫鍵而形成的疏水腔空穴。（２）－－ｎｓＬＴＰ原核表達(dá)載體成功構(gòu)建ｐＥＴ３２ａ，在ＩＰＴＧ誘導(dǎo)下可在短時間內(nèi)（３ｈ）獲得了大量重組蛋白。該蛋白為可溶性蛋白，低溫及提高誘導(dǎo)劑濃度有ｉｓｔｌｔ利于重組蛋白可溶性表達(dá)。通過ｆｉ標(biāo)簽純化獲得了重組蛋白，ＷｅｓｅｒｎＢｏ驗證顯示獲得的蛋白為目的
7、重組蛋白一。ｎｓＬＴＰ基因原核表達(dá)及蛋白純化為進(jìn)步研究ｎｓＬＴＰ蛋白功能提供了基礎(chǔ)。（３）ＢＩ－１２１－ＧＦＰ－ｎｓＬＴＰ成功構(gòu)建了亞細(xì)胞定位載體ｐ，并轉(zhuǎn)化根癌農(nóng)桿菌ＥＨＡ１０５感受態(tài)細(xì)胞－，侵染洋蔥表皮細(xì)胞，通過激光共聚焦顯微鏡觀察ｐＢＩ１２１－－。－ＧＦＰｎｓＬＴＰ融合蛋白綠色熒光信號在細(xì)胞中的分布情況結(jié)果表明，ＧＦＰＩ暨南大學(xué)碩士學(xué)位論文ｎｓＬＴＰ融合蛋白綠色熒光信號分布在細(xì)胞壁上，細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞膜中均一未顯示。為進(jìn)步確認(rèn)融合蛋白熒光信號的分布，利用蔗糖溶液將洋蔥細(xì)胞進(jìn)行質(zhì)壁分離，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，原生質(zhì)體
8、明顯皺縮，細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜中無熒光信號，而細(xì)胞壁上發(fā)現(xiàn)了明顯熒光信號，說明菜心中ｎｓＬＴＰ蛋白定位在細(xì)胞壁
