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《鵝源副黏病毒病單克隆抗體的制備及膠體金快速診斷試紙條的研制》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、鵝副黏病毒單克隆抗體的制備及膠體金快速診斷試紙條的研究摘要木實(shí)驗(yàn)建立了檢測鵝副黏病毒的快速夾心膠體金免疫層析測試試紙條(ICS)。第一部分，制各鵝副黏病毒的單克隆抗體。采用PEG沉淀法結(jié)合SephdexG200層析柱法提純強(qiáng)毒JG04株GPMv，蛋白含量為1283m∥mL，HA效價(jià)為2”10。提純的GPMv用于免疫小鼠和ELISA包埋；采用PEGl500進(jìn)行融合，融合率為465％：采用間接ELISA試驗(yàn)和HI試驗(yàn)雙向檢測雜交瘤細(xì)胞分泌的抗體，陽性率為784％；采用有限稀釋法進(jìn)行三次克隆，獲得兩株
2、穩(wěn)定分泌抗JG04株鵝副黏病毒抗體的雜交瘤細(xì)胞株，命名為3A5、2C6。其中3A5腹水的ELIsA效價(jià)為l：51200，沒有HI效價(jià)；2c6腹水的EuSA效價(jià)為1：6400，HI效價(jià)為27。第二部分，制備快速夾心膠體金免疫層析檢測試紙條。采用檸檬酸鈉還原法制備膠體金：將提純的雞IgG(抗JG04株GPMv)噴涂在NC膜上，檢測線(T)；將金標(biāo)3A5作為檢測試劑，噴涂在玻璃纖維上二。在加樣處沾取含有GPMV的尿囊液樣品，GPMv與金標(biāo)3A5結(jié)合形成混合液，由于層析原理，混合液向上移動，在檢測線(T
3、)上混和液中與金標(biāo)顆粒結(jié)合的GPMV與雞IgG結(jié)合，由于大量GPMV沉積在檢測線上，出現(xiàn)紅線；而如果尿囊液中不含有GPMv，檢測線上不出現(xiàn)紅線。該試紙條不與越V、EDSV、IBDV、mV、GPv、CELO的尿囊液和MV、CDV發(fā)生交叉反應(yīng)，說明該試紙條有較高的特異性。用該試紙條對GPMV、孔雀源NDV毒株，鴿源NDv毒株、新城疫Lasota株、雞源NDv的尿囊液進(jìn)行檢測，均為陽性。證明其不僅與GPMv發(fā)生反應(yīng)，還可以與不同易感動物源的NDv發(fā)生反應(yīng)，可以廣泛的應(yīng)用到NDV的多種易感動物的檢測。G
4、PMv膠體金免疫層析試紙條以免疫層析法為基礎(chǔ)，利用抗原一抗體的特性，用一種新奇的方式進(jìn)行快速診斷。由于這種方法快速、簡便，易保存，不需要專業(yè)人員和特殊儀器，大大縮短了常規(guī)實(shí)驗(yàn)室檢測所需時(shí)問，特別適臺于廣大基層單位、醫(yī)院、野外作業(yè)人員以及大批量時(shí)間緊的檢測和大面積普查等。關(guān)鍵詞：鵝副黏病毒，單克隆抗體，免疫層析試紙條，膠體金DevelopmentofMcAbtoGPMVandtheStudyon1CStoDiaglloseGPMVAbstractInthisstud)，，weestablishar
5、apidandscnsitivesalldwichimmunochroJnatographicstrip(1cs)fbrgooseparamyxovims(GPMV)detectio“Par【oneisgetmemonocionalantibodies(McAbs)∞GPMVJG04s甘ainvimlentGPMVwaspuri6edbyPEG6000followcdbys印hdexG200columnchromatographv，protcnd．ViraJpro崩nl283mg／mL，HA29
6、、m．ImmuningBALBC／CmouseaIldcoa“ngELISAwithantigentllatispllrinedGPMVFunsionbyPEGl500，t11efusingratei暑465％；OIlrscreeningoftI坨h如ridomacellsbyiIldirectELISAandHI，Ihepositiverateis78．4％：Posi“vehybridomacellweresubclonedthreeCimesbyIimiteddilitionT、Ⅳohybr
7、idomacelllineswhichcallstablysecreteMcAb啪sobtaineda11ddesignated3A5and2C6．AndtheEUSAtitersof3A5incellsupernat鋤tandAscitic、vcrel：5l200鋤dl：512，noneHIdters；theELISAtitersof2C6incellsupematantandAsciticwcrel：6400鋤d1：64，HItiterswerc24Ⅻd27．Partt、砌isdevelop
8、arapidalldsensitivesand、vichimmllIlochromalograpllics仃ipTri·sodiumcitratewilhaqueous90ld跚嘶dewcrewannedup蛐dmixedtomakegolds01：ThechickenIgG(觚ti_JG04s扭ainGPMV)waSimmobilizedtoadefineddetecti0Ilzone(T)0napomusnitrocellulosemembrane，wllile3A5wasconjugate
