《疫分析技術(shù)》PPT課件

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1、免疫分析方法概述免疫是機(jī)體識別和排除進(jìn)人體內(nèi)的抗原性異物的保護(hù)性應(yīng)答反應(yīng)。起始于本世紀(jì)50年代,首先應(yīng)用于體液大分子物質(zhì)的分析；1960美國學(xué)者Yalow和Berson等開創(chuàng)了放射免疫分析方法的先河；同年,Oliver開辟了用免疫分析法測定小分子藥物的新領(lǐng)域。免疫分析方法原理：通過對半抗原或抗體進(jìn)行標(biāo)記，利用標(biāo)記物的生物或物理或化學(xué)放大作用來進(jìn)行工作，它集測定的高靈敏性和抗體反應(yīng)的強(qiáng)特異性于一體。優(yōu)點(diǎn)：操作簡單、快速、靈敏度高、特異性強(qiáng)、價廉、樣品所需量少免疫分析方法非標(biāo)記免疫分析技術(shù)標(biāo)記免疫分析技術(shù)免疫擴(kuò)散免疫電

2、泳標(biāo)記免疫分析技術(shù)標(biāo)記免疫分析技術(shù)標(biāo)記免疫分析技術(shù)膠體金免疫技術(shù)發(fā)光免疫技術(shù)鐵蛋白免疫技術(shù)熒光免疫技術(shù)放射免疫分析酶免疫分析免疫分析方法免疫電泳免疫分析方法膠體金免疫技術(shù)發(fā)光免疫技術(shù)鐵蛋白免疫技術(shù)熒光免疫技術(shù)放射免疫分析酶免疫分析免疫電泳免疫分析方法膠體金免疫技術(shù)發(fā)光免疫技術(shù)鐵蛋白免疫技術(shù)熒光免疫技術(shù)放射免疫分析酶免疫分析免疫電泳免疫分析方法膠體金免疫技術(shù)發(fā)光免疫技術(shù)鐵蛋白免疫技術(shù)熒光免疫技術(shù)放射免疫分析酶免疫分析免疫電泳免疫分析方法免疫電泳免疫分析方法免疫分析標(biāo)記技術(shù)簡介:免疫分析標(biāo)記技術(shù)是指以抗原抗體間的特異性

3、反應(yīng)為基礎(chǔ),研究標(biāo)記以各種標(biāo)記物(定量信號)來對某種物質(zhì)進(jìn)行定性或定量檢測的研究。至2007年，應(yīng)用于免疫分析檢測中的各種標(biāo)記技術(shù):放射物標(biāo)記、酶標(biāo)記、發(fā)光標(biāo)記、熒光標(biāo)記、金標(biāo)記和超順磁粒子標(biāo)記等放射免疫分析原理：以放射性同位素為示蹤物,與免疫反應(yīng)相結(jié)合的一種分析方法,提供的檢測信號是不斷發(fā)出的放射線。常用來標(biāo)記的放射性同位素：3H、14C、25N、121I、125I等。優(yōu)點(diǎn)：準(zhǔn)確靈敏、特異性強(qiáng),儀器試劑價格低廉、技術(shù)成熟。缺點(diǎn)：藥盒的使用壽命短,批間、批內(nèi)變異較大，難進(jìn)行自動化分析。酶免疫分析方法原理：以酶標(biāo)記抗

4、原或抗體作為示蹤物,由高活性的酶催化底物顯色或發(fā)光,達(dá)到定量分析的目的。到目前為止,酶標(biāo)記法所用的酶大多是辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶、酸性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等。酶通過與自己的特殊作用底物反應(yīng),而產(chǎn)生典型的有色沉淀物。優(yōu)點(diǎn)：避免對人體的放射性傷害、環(huán)境的污染，酶標(biāo)記物較穩(wěn)定,半衰期可超過1年.酶免疫反應(yīng)通常不需要溫育，不需將與抗體結(jié)合的標(biāo)記藥物同游離的標(biāo)記藥物分開,.產(chǎn)生的信號用普通的可見一紫外分光光度計就可測定,不需昂貴的儀器沒備。缺點(diǎn)：標(biāo)記酶不像同位素標(biāo)記物,熒光標(biāo)記物那樣能直接產(chǎn)生信號,而必須要何其它試劑,如

5、酶底物,輔酶的參與,才能完成酶反應(yīng),引起吸收光譜等變化后方可進(jìn)行測定.熒光免疫分析法原理：以熒光物質(zhì)標(biāo)記抗原或抗體,形成的標(biāo)記物發(fā)生免疫反應(yīng)后,引起熒光強(qiáng)度發(fā)生變化,從而達(dá)到定量分析的目的。目前為止認(rèn)為比較滿意標(biāo)記物的有:異硫氰酸熒光素(FITC)、二氯三嗪氨基熒光素(DTAP)、四乙基羅丹明(RB200)和四甲基異硫氰酸羅丹明(TMRITC)。化學(xué)發(fā)光免疫分析法原理：將高靈敏度的化學(xué)發(fā)光測定技術(shù)與高特異性的免疫反應(yīng)相結(jié)合,借以檢測抗原或抗體的分析技術(shù)。它兼有發(fā)光分析的高靈敏度和免疫反應(yīng)的特異性。優(yōu)點(diǎn)：靈明度高，線

6、性范圍寬，光信號持續(xù)時間長，分析方法簡便快速，結(jié)果穩(wěn)定、誤差小，安全性好，使用周期長。方法優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)放射免疫試劑成本低，靈敏度較高操作復(fù)雜，放射性污染，有效期短酶聯(lián)免疫試劑成本低，操作簡單靈敏度低，適用于定性和半定量測定化學(xué)發(fā)光操作簡單，成本較低，靈敏度較高，試劑較穩(wěn)定工作曲線隨時間漂移時間分辨靈敏度較高，試劑較穩(wěn)定操作復(fù)雜，發(fā)光時間短，試劑成本高，儀器維護(hù)費(fèi)用較高電化學(xué)發(fā)光靈敏度較高，試劑較穩(wěn)定操作復(fù)雜，試劑成本高，儀器維護(hù)費(fèi)用較高，有本底干擾化學(xué)發(fā)光免疫分析含有免疫分析和化學(xué)發(fā)光分析2個系統(tǒng)。免疫分析系統(tǒng)是將化學(xué)

7、發(fā)光物質(zhì)或酶作為標(biāo)記物,直接標(biāo)記在抗原或抗體上,經(jīng)過抗原與抗體反應(yīng)形成抗原-抗體免疫復(fù)合物。化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)是在免疫反應(yīng)結(jié)束后,加入氧化劑或酶的發(fā)光底物,化學(xué)發(fā)光物質(zhì)在堿性介質(zhì)中經(jīng)氧化劑的氧化時釋放大量自由能,產(chǎn)生激發(fā)態(tài)的中間體，該激發(fā)態(tài)的中間體由最低振動能級回到穩(wěn)定的基態(tài)，各個振動能級時產(chǎn)生輻射，同時產(chǎn)生能量，多余的能量即為發(fā)射光子，從而產(chǎn)生發(fā)光現(xiàn)象。發(fā)光強(qiáng)度可以利用發(fā)光信號測量儀器進(jìn)行檢測、分析接收光量子的產(chǎn)量，根據(jù)化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物與發(fā)光強(qiáng)度的關(guān)系,可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出被測物的含量。常見的發(fā)光體系魯米諾、異魯米諾

8、及其衍生物類：魯米諾、異魯米諾及其衍生物類：吖啶類化合物：吖啶類化合物：（金剛烷）-1,2-二氧乙烷及其衍生物（金剛烷）-1,2-二氧乙烷及其衍生物（金剛烷）-1,2-二氧乙烷及其衍生物電化學(xué)發(fā)光體電化學(xué)發(fā)光體電化學(xué)發(fā)光體生物發(fā)光體系北美熒火蟲體內(nèi)的熒光素/熒光素酶是著名的生物化學(xué)發(fā)光體系,它由蟲熒光素酶、蟲熒光素、ATP、Mg2+及O2所組成。蟲熒光素酶在