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《骨橋蛋白新功能表位的篩選與鑒定》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、上海交通大學(xué)博士學(xué)位論文中文摘要骨橋蛋白新功能表位的篩選與鑒定摘要骨橋蛋白(osteopotin，OPN)，也稱為早期T淋巴細胞激活因子1，它是一種多功能的細胞外基質(zhì)蛋白，具有多種生理和病理功能，包括骨的修復(fù)，腫瘤和炎癥。OPN蛋白在多發(fā)性硬化癥、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和炎性腸炎等自身免疫性疾病的病理部位明顯增高。OPN作為自身免疫病發(fā)病潛在的關(guān)鍵因子已成為人們關(guān)注的焦點。T細胞介導(dǎo)的炎癥在自身免疫病中起著非常重要的作用。OPN通過和細胞表面的相應(yīng)受體相互作用，誘導(dǎo)其下游的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，介導(dǎo)淋巴細胞的遷移及活化。OPN分子上具有
2、多個不同的功能表位，每～個功能表位所結(jié)合的受體不同，從而介導(dǎo)不同的功能。值得注意的是OPN的N端(包括第四和第五外顯子)的受體其生理功能還未確定。為了進一步研究OPN分子中的功能表位及其在自身免疫性疾病中的作用，我們利用雜交瘤技術(shù)制備了兩株新的抗OPN單克隆抗體：23C3D3和F8E11；通過噬菌體隨機肽庫篩選技術(shù)，鑒定了兩株抗OPN抗體的抗原表位分別為WLNPDP和QLYreKVV。23C3D3能夠有效抑制II型膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎小鼠模型的疾病進程，甚至能夠顯著改善已經(jīng)建立的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型小鼠的癥狀。23C3D3也能夠有效抑制促炎癥
3、因予的產(chǎn)生和關(guān)節(jié)炎小鼠關(guān)節(jié)組織中T淋巴細胞的浸潤。在CIA小鼠來源的淋巴細胞模型中，表位肽23P(包含有WLNPDP基序)和表位WLNPDP的阻斷抗體23C3D3能有效抑制OPN誘導(dǎo)的細胞粘附、遷移和存活。突l上海交通大學(xué)博士學(xué)位論文中文摘要變WLNPDP構(gòu)建OPN突變體，突變后的OPN對淋巴細胞活化的能力顯著減弱。功能實驗的結(jié)果顯示：WLNPDP通過誘導(dǎo)趨化因子CCL2，CCL3，CCL4，CXCLl和CXCL5表達促進淋巴細胞的遷移。另外，,WLNPDP還通過活化轉(zhuǎn)錄因子NF．r．B通路、改變促凋亡蛋白Bcl一2和抗凋亡蛋白Bim的
4、表達量的平衡維持T淋巴細胞的存活。這些結(jié)果證明：表位．WLNPDP是OPN蛋白誘導(dǎo)淋巴細胞遷移和存活的重要功能域。在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和其他自身免疫性疾病發(fā)生發(fā)展中可能起著重要作用。這為類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等自身免疫病提供了重要的治療靶點。關(guān)鍵詞：骨橋蛋白，功能表位，自身免疫病，噬菌體展示，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，抗體2上海變通大學(xué)博士學(xué)位論文英文摘要SCREENINGANDIDENTIFICATIONOFOPNNOVELFUNCTIONALDoMAINABSTRACTOsteopontin(0PN；alsocalled‘earlyTcell-activ
5、ationgene1’)isamultifunctionalproteinthathasbeenlinkedtomanyphysiologicalandpathologicalevents，includingboneremodeling，cancerandinflammation．ThemuchhigherexpressionofOPNatthesiteofpathologyinseveralautoimmunediseases，includingmultiplesclerosis，systemiclupuserythematosus，
6、rheumatoidarthritisandinflammatoryboweldisease，hasfocusedattentiononthismoleculeasapotentiallycriticalfactorinpathogenesis．Tcell—mediatedinflammationplaysanimportantroleinautoimmunediseases．Thebindingof0PNtoavarietyofcellsurfacereceptorsinducessignalingevenmthatpromotece
7、lladhesion，migrationandsurvival．OPNhasdifferentfunctionaldomainsandeachfunctionaldomainresultsindifferentfunctionsbyinteractionwithunidenticalreceptors．Sofar,thephysiologicorpatho-physiologicrolesofthefarN-terminalosteopontindomains(includingexons4and5)havenotyetbeendefi
8、ned．Toidentifynovelfunctionalepitopesof0PN，wedevelopedtwomonoclonalantibodiesspecificforhuman0PNbyclass
