牛糞細(xì)菌殺線蟲活性篩選及揮發(fā)性代謝產(chǎn)物的研究

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1、云南大學(xué)碩士論文M．S．DISSERTATIONThenematicidalactivityandvolatileorganiccompoundsofbacteriaisolatedfromCOWdungByLUHaoDirectedbyAssoc．Prof．LiGuo—hongYunnanUniversity,Kunming，P．R．ChinaMay,2013資助項(xiàng)目973項(xiàng)目：農(nóng)作物重要病原線蟲生物防控的基礎(chǔ)研究，第五課題“新型天然殺線蟲活性化合物的發(fā)掘及作用機(jī)制”(2013CBl27505)云南大學(xué)碩士論文扉頁：獨(dú)創(chuàng)性聲明IIllllllllllUllrllll

2、lllllfllllllllfllllllfY2378866本人聲明所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，對(duì)本文的研究做出貢獻(xiàn)的集體和個(gè)人均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。論文使用和授權(quán)說明期：塑堅(jiān)．至本人完全了解云南大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交學(xué)位論文和論文電子版：允許論文被查閱或借閱；學(xué)校可以公布論文的全部或部分內(nèi)容，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文。(保密的論文在解密后應(yīng)遵循此規(guī)定)研究生

3、簽名：爭鳋導(dǎo)師簽名：窒固笙曼日期：壘釜圣：至本人及導(dǎo)師同意將學(xué)位論文提交至清華大學(xué)“中國學(xué)術(shù)期刊(光盤版)電子雜志社”進(jìn)行電子和網(wǎng)絡(luò)出版，并編入(3NKI系列數(shù)據(jù)庫，傳播本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容，同意按《中國優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫出版章程》規(guī)定享受相關(guān)權(quán)益。研究生簽名：導(dǎo)師簽名：——日期：云南大學(xué)碩士論文摘要植物寄生線蟲是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中重要的植物病原之一，使作物減產(chǎn)從而給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)帶來重大損失。目前細(xì)菌已廣泛的運(yùn)用于生物防治中，其代謝產(chǎn)物是新興的天然化合物的重要來源。細(xì)菌產(chǎn)生的多種代謝物中，部分化合物具有抗腫瘤、抑菌、殺蟲等活性。本研究對(duì)牛糞中分離得到的細(xì)菌進(jìn)行了殺

4、線蟲活性篩選，部分細(xì)菌具有產(chǎn)生揮發(fā)性殺線蟲活性代謝產(chǎn)物的能力，對(duì)這些產(chǎn)生揮發(fā)性殺線蟲代謝產(chǎn)物的細(xì)菌進(jìn)行了分子生物學(xué)水平上的鑒定；利用GCMS對(duì)其產(chǎn)生的揮發(fā)性有機(jī)物進(jìn)行了鑒定，并測試了其產(chǎn)生的揮發(fā)性化合物的殺線蟲活性。本文主要研究結(jié)果如下：1．對(duì)前期分離的224株牛糞細(xì)菌進(jìn)行殺線蟲活性篩選，44株細(xì)菌發(fā)酵液對(duì)秀麗隱桿線蟲(Caenorhabditiselegans)具有致死活性，24h時(shí)對(duì)秀麗隱桿線蟲(Celegans)致死率達(dá)到100％的有23株，占細(xì)菌總數(shù)的10．27％，22株在1h時(shí)活性達(dá)到90％以上，占細(xì)菌總數(shù)的9．82％。對(duì)22株高活性菌株進(jìn)行揮發(fā)性殺線蟲活性

5、篩選，其中19株能產(chǎn)生毒殺秀麗隱桿線蟲(Celegans)和南方根結(jié)線蟲(Meloidogyneincognita)的揮發(fā)性代謝產(chǎn)物。2．對(duì)22株高活性細(xì)菌進(jìn)行分子生物學(xué)鑒定?；?6SrRNA基因序列的鑒定結(jié)果表明，這些細(xì)菌分別屬于糞產(chǎn)堿桿菌(Alcaligenesfaecal&)、蠟樣芽胞桿菌(Bacilluscereus)、彭氏變形桿菌(Proteuspenneri)、豪氏變形桿菌(Proteushauseri)、雷氏普羅威登斯菌(Providenciarettgeri)、松鼠葡萄球菌(Staphylococcussciw。f)、木糖葡萄球菌(Staphyloc

6、occusxylosus)、氣生微桿菌(Microbacteriumaerolatum)、甜菜假單胞菌(Pseudomonasbeteli)、煙草節(jié)桿菌(Arthrobacternicotianae)、木糖氧化無色桿菌(Achromobacterxylosoxidans)、Wautersiellafalsenii和Pseudochrobactrumsaccharolyticum。系統(tǒng)發(fā)育分析表明這些不同分類地位的殺線蟲細(xì)菌聚類形成三個(gè)進(jìn)化分支。3．利用SPME．GCMS聯(lián)用法對(duì)5株產(chǎn)生殺線蟲揮發(fā)性代謝產(chǎn)物的細(xì)菌進(jìn)行揮發(fā)性產(chǎn)物的鑒定?；钚詼y試結(jié)果顯示細(xì)菌產(chǎn)生的揮發(fā)性化合

7、物中，二甲基二硫醚、云南大學(xué)碩士論文硫代丁酸甲酯、3．甲基．2．丁烯酸乙酯、苯乙酮、2．壬酮、對(duì)甲基苯甲醚和異戊酸丁酯具有殺線蟲活性。本論文的創(chuàng)新性體現(xiàn)為：1．首次報(bào)道了變形桿菌屬(Proteusspp．)、普羅威登斯菌屬(Providenciaspp．)、葡萄球菌屬(Staphylococcusspp．)、節(jié)桿菌屬(Arthrobacterspp．)、無色桿菌屬(Achromobacterspp．)、Wautersiellaspp．和Pseudochrobactrumspp．具有殺線蟲活性。2．首次報(bào)道了硫代丁酸甲酯、3．甲基．2．丁烯酸乙酯、對(duì)甲