具殺線蟲活性植物內(nèi)生細(xì)菌和根際放線菌的篩選與防效分析

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1、2．3最佳培養(yǎng)基碳源的篩選?：?????????。???????????。482j4正交優(yōu)化?????????????????????????????493、小結(jié)與討論??????????????????????????????5l第六章具殺線蟲活性植物內(nèi)生細(xì)菌和放線菌的防效實(shí)驗(yàn)．1材料與方法??????????????．：????????????????531．1供試材料????????????????????????????531．1．1菌株???????????????????????????????????。531．1．2培養(yǎng)基?????????????????????

2、?????531．1．3實(shí)驗(yàn)儀器和試劑??????????????????????54。1．2實(shí)驗(yàn)方法????????????????????????????．541．2．1培育番茄苗????????????????????????．541．2．2放線菌對番茄根結(jié)線蟲的防效實(shí)驗(yàn)?????：?????????．541．2．3植物內(nèi)生細(xì)菌對番茄根結(jié)線蟲的防效實(shí)驗(yàn)???????????．541．2．4放線菌和內(nèi)生細(xì)菌對番茄根結(jié)線蟲的復(fù)合防效實(shí)驗(yàn)???????．552結(jié)果與分析??????????????????????????????．55Z1放線菌對番茄根結(jié)線蟲的防效???????

3、????????????．552．2植物內(nèi)生細(xì)菌對番茄根結(jié)線蟲的防效????????????????。552．3放線菌和植物內(nèi)生細(xì)菌復(fù)配對番茄根結(jié)線蟲的防效??????????．．563小結(jié)與討論???????????????????????????????57全文小結(jié)參考文獻(xiàn)在讀期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與研究成果???．致謝附圖?????。?．．59616970．．．??．71摘要植物寄生線蟲是危害植物的重要病原物，為了篩選到對植物寄生線蟲具有較高殺線蟲活性的植物內(nèi)生細(xì)菌和植物根際放線菌。本研究進(jìn)行了內(nèi)生細(xì)菌殺線蟲活性菌株的分離、篩選和鑒定，并對其中活性最強(qiáng)的菌株進(jìn)行了發(fā)酵條件的優(yōu)

4、化；研究了內(nèi)生細(xì)菌和根際放線菌發(fā)酵產(chǎn)物殺線蟲物質(zhì)的穩(wěn)定性；還研究了內(nèi)生細(xì)菌和放線菌對根結(jié)線蟲的防治效果，以及內(nèi)生細(xì)菌和放線菌復(fù)配對根結(jié)線蟲的防治效果；結(jié)果如下：一1、采用組織分離法從6種植物中分離篩選出112株內(nèi)生細(xì)菌，用黃瓜無菌苗定殖量測定法篩選得到64株能穩(wěn)定定殖的菌株。以松材線蟲為靶標(biāo)，用直接觸殺法進(jìn)行篩選，從這64株能穩(wěn)定定殖的菌株中篩選得到13株對松材線蟲具有較高殺線蟲活性的植物內(nèi)生細(xì)菌，這些菌株的發(fā)酵上清液對松材線蟲處理24h殺線蟲率均達(dá)到了100％；其中BCM2、SZ5、CCM7和DPI這4個(gè)菌株的殺線蟲活性較高，發(fā)酵上清液稀釋3倍處理24h殺線蟲率均達(dá)到95％以

5、上，DPI和SZ5菌株達(dá)到了100％；并發(fā)現(xiàn)部分菌株發(fā)酵液能使線蟲蟲體發(fā)生滲漏或消解。2、同時(shí)本文還對土壤中分離得到的326株放線菌進(jìn)行了殺線蟲活性的篩選，得到了2l株具有殺線蟲活性的放線菌，這2l株放線菌的發(fā)酵上清液對松材線蟲的24h處理死亡率均達(dá)到了80％以上，其中有8株放線茵發(fā)酵液的殺線蟲活性達(dá)到了100％，而且部分菌株也能產(chǎn)生使線蟲消解的物質(zhì)。經(jīng)過對其中16株活性較高的放線菌進(jìn)行復(fù)篩，得到了五株活性較好的放線菌，分別為：NKl7、NKl9、凇7、№9和V21。3、采用生理生化鑒定和16SrDNA序列測定方法鑒定了4株高活性植物內(nèi)生細(xì)菌的歸屬種類，結(jié)果鑒定DPI和CCM7

6、為枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)，BCM2和SZ5是蠟樣芽孢桿菌(BacillUScereus)。．’4、經(jīng)過殺線蟲代謝物質(zhì)的理化性質(zhì)的研究和發(fā)酵液中殺線蟲活性物質(zhì)的穩(wěn)定性測定，證明5株放線菌產(chǎn)生的殺線蟲物質(zhì)均是一種可以揮發(fā)的小分子堿性物質(zhì)；4株植物內(nèi)生細(xì)菌產(chǎn)生的物質(zhì)是一種對蛋白酶穩(wěn)定、耐熱不耐酸堿且長時(shí)間保藏活性不下降的小分子肽類物質(zhì)。5、采用單因素法測定4株植物內(nèi)生細(xì)菌發(fā)酵產(chǎn)生殺線蟲物質(zhì)的最佳碳氮源，并對這4株高活性植物內(nèi)生細(xì)菌菌株采用正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)化發(fā)酵條件，結(jié)果表明這4株植物內(nèi)生細(xì)菌產(chǎn)生殺線蟲物質(zhì)的最佳碳源是蛋白胨，最佳氮源是牛肉膏，正交優(yōu)化后使發(fā)酵液殺

7、線蟲效果提高了4倍。．6、用盆栽苗灌根法研究了活性放線菌和植物內(nèi)生細(xì)菌對根結(jié)線蟲的防治效果以及放線菌和內(nèi)生細(xì)菌的復(fù)合防效。放線菌對番茄根結(jié)線蟲的防效結(jié)果較好的是NK29和NKl7，分別為38．17％和37．63％；而供試的7株植物內(nèi)生細(xì)菌中除DPI外的6株植物內(nèi)生細(xì)菌對番茄根結(jié)線蟲均有一定的防治效果，其中BCM2和DP24對番茄根結(jié)線蟲的防治效果較好，分別為57．35％和50％，其次為CCM7和DLJl。將BCM2和CCY7分別進(jìn)行對番茄根結(jié)線蟲的治療實(shí)驗(yàn)和防治實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明這兩株內(nèi)生細(xì)菌對