IFNα1b對人子宮內(nèi)膜腺癌細胞系JEC增殖 的影響及機制

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1、IFNα1b對人子宮內(nèi)膜腺癌細胞系JEC增殖的影響及機制【摘要】目的研究IFNα1b對子宮內(nèi)膜腺癌細胞系JEC增殖及細胞周期的影響。方法不同濃度的IFNα1b作用24h后，通過細胞計數(shù)觀察對JEC的抗增殖效應(yīng)，應(yīng)用流式細胞技術(shù)分析細胞周期改變和細胞周期調(diào)控因子p21，cyclinA和cyclinE的表達。結(jié)果不同濃度的IFNα1b對JEC均有抗增殖作用，其中500U/ml抗增殖作用最強。流式細胞儀（FCM）檢測顯示S期細胞積累，p21的表達增加和cyclinA表達減少，而cyclinE的表達增加。結(jié)論IFNα1b能夠抑制子宮內(nèi)膜腺癌細胞系JEC的增殖，其機理可能

2、與p21的表達增加和cyclinA表達減少，導致S期細胞積累有關(guān)?！娟P(guān)鍵詞】子宮內(nèi)膜腺癌細胞系JECIFNα1bP21cyclinEcyclinA1材料和方法1.1材料人子宮內(nèi)膜腺癌細胞系JEC來源于臨床診斷為子宮內(nèi)膜腺癌Ⅳ期患者的腹水，由遵義醫(yī)學院微生物學教研室建立培養(yǎng)。IFNα1b為深圳科興生物制品有限公司產(chǎn)品。cyclinE、cyclinA、p21試劑盒均購自天津天象人生物有限公司。PI為美國Sigma公司產(chǎn)品。1.2方法1.2.1細胞培養(yǎng)JEC置入含有10%小牛血清、100U/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素的RMPI1640培養(yǎng)液中，放

3、在37℃、5%CO2的孵箱中培養(yǎng)。取對數(shù)生長期細胞，以1.0×105細胞/孔加入24孔培養(yǎng)板或培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)24h，換成含3%小牛血清培養(yǎng)液的0U/ml,100U/ml,500U/ml,2000U/mlIFNα1b使用液孵育24h，進行檢測。每組設(shè)3個平行孔。1.2.2細胞計數(shù)細胞培養(yǎng)在24孔培養(yǎng)板中，經(jīng)0.25%胰酶消化，冷PBS吹打成單個細胞，細胞計數(shù)板計數(shù)。1.2.3細胞周期分析采用流式細胞儀。細胞培養(yǎng)在培養(yǎng)瓶中，經(jīng)0.25%胰酶消化，冷PBS吹打成單個細胞，70%冷乙醇固定，加入50ug/mlPI染液1ml,4℃避光染色30min,上機分析

4、。1.2.4cyclinE的檢測細胞培養(yǎng)在培養(yǎng)瓶中，經(jīng)0.25%胰酶消化，冷PBS吹打,4%多聚甲醛固定20min，0.1%TritonX100孵育10min，加兔抗人cyclinE單克隆抗體37℃孵育2h，漂洗離心后，用山羊抗兔IgGFITC標記，4℃，1h，漂洗離心后，F(xiàn)CM檢測。1.2.5cyclinA和p21的檢測細胞培養(yǎng)在培養(yǎng)瓶中，經(jīng)0.25%胰酶消化，冷PBS吹打,4%多聚甲醛固定20min，0.1%TritonX100孵育10min，加鼠抗人一抗37℃孵育2h，漂洗離心后，用山羊抗鼠IgGFITC標記，4℃，1h，漂洗離心后，F(xiàn)CM檢測。1.2.6試

5、驗結(jié)果以均數(shù)±標準差(±s）表示，SPSS11.5統(tǒng)計軟件進行處理，顯著性差異以P＜0.05為準。2結(jié)果2.1IFNα1b對JEC增殖的影響隨濃度的增加，細胞數(shù)量明顯減少，在500U/ml時抗增殖作用最強。2000U/ml有抗增殖作用，但抗增殖能力下降,見表1。表1IFNα1b作用24h后對JEC增殖的影響*相鄰濃度比較P<0.012.2細胞周期的分析隨IFNα1b濃度增加，S期細胞數(shù)量相應(yīng)增加，呈劑量依賴關(guān)系。0U/ml組和100U/ml組G0/G1期細胞數(shù)量沒有差異(P>0.05)；500U/ml組和2000U/ml組G0/G

6、1期細胞數(shù)量沒有差異(P>0.05)；而500U/ml組G0/G1期細胞數(shù)量少于100U/ml組，差異有顯著性(P<0.01),見表2。2.3p21表達隨IFNα1b濃度增加，p21含量增加，在500U/ml表達最高，而在2000U/ml表達水平降低，見表3。2.4cyclinE表達隨IFNα1b濃度增加，cyclinE含量增加，在500U/ml時表達最高，而在2000U/ml表達水平降低，見表4。表2不同濃度IFNα1b作用24h后細胞周期各時相分布3討論由于不同的IFNα亞型抗癌能力有差別[2]，本研究探討IFN

7、α1b對子宮內(nèi)膜腺癌細胞系JEC增殖的影響。IFNα1b在一定的范圍內(nèi)隨濃度的增加抗增殖能力增強，呈劑量依賴性關(guān)系；超過一定范圍后，隨濃度繼續(xù)增加，抗增殖能力下降。這與前期實驗中IFNα抗增殖作用隨濃度升高而增強的結(jié)果有區(qū)別[1]。細胞周期是細胞增殖的基礎(chǔ)，故我們檢測IFNα1b給藥后細胞周期時相分布的變化。結(jié)果顯示隨濃度的增加，S期細胞積累，這可能是IFNα1b抑制JEC細胞增殖主要原因。由于S期細胞積累呈劑量依賴性關(guān)系，推測隨著給藥時間的延長，抗增殖能力