姜黃素對人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響

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1、姜黃素對人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響李偉宏焦金菊王青青常志杰【摘要】目的：探討姜黃素對人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞(HEC1B)增殖和凋亡的影響。方法：應(yīng)用6.67～66.67μmol/L的姜黃素分別處理HEC1B48h后,采用MTT法檢測姜黃素對HEC1B的增殖程度的影響；流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞周期時(shí)相分析；熒光顯微鏡觀察細(xì)胞核形態(tài)的變化。結(jié)果：①M(fèi)TT法顯示培養(yǎng)48h后，姜黃素組的吸光度值A(chǔ)490nm低于對照組(P0.01),且在一定濃度范圍內(nèi)呈劑量依賴性；②流式細(xì)胞儀檢測顯示培養(yǎng)48h后，姜黃素組的G2/M比例高于對照組(P0.05)，且在一定濃度范圍內(nèi)呈劑

2、量依賴性；③熒光顯微鏡下給藥組部分細(xì)胞發(fā)生凋亡形態(tài)學(xué)改變，凋亡率為10.22%～34.72%。結(jié)論：姜黃素可抑制HEC1B的增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，其誘導(dǎo)凋亡的機(jī)制可能是通過將細(xì)胞阻滯在G2/M期來實(shí)現(xiàn)的?！娟P(guān)鍵詞】姜黃素；HEC1B；增值；細(xì)胞周期；凋亡姜黃（curcuma）是一種傳統(tǒng)的中藥，廣泛用于食品上色和調(diào)味。姜黃素(curcumin)是從姜黃中提取的酚性色素，是姜黃的主要有效成分，具有抗炎、抗氧化、抗凝、降血脂及抗動脈粥樣硬化、抗腫瘤等作用，尤其作為一種具有良好發(fā)展前景的抗癌藥物，日益引起人們的關(guān)注，成為研究的熱點(diǎn)〔1〕。本實(shí)驗(yàn)采用體外細(xì)胞培養(yǎng)的方

3、法來探討姜黃素對人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞（HEC1B）的作用。1材料和方法1.1材料1.1.1細(xì)胞株人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株（HEC1B）由北京細(xì)胞中心提供。1.1.2藥物及試劑MEM培養(yǎng)液，1：250胰蛋白酶，Hoechst33258染色劑，姜黃素C1386(美國sigma公司)；標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清(standardFBS，天津?yàn)笊镏破房萍钾?zé)任有限公司，批號20071230)；AnnexinVFITC試劑盒(晶美生物工程有限公司)。1.2方法1.2.1細(xì)胞增殖的測定（MTT法）取對數(shù)期生長的HEC1B，胰酶消化制成密度為5×106/L的細(xì)胞懸液，接種于96孔板，每

4、孔200μl。24h后細(xì)胞完全貼壁展開，更換培養(yǎng)液，分別設(shè)對照孔(不加姜黃素而加等量的培養(yǎng)液)、空白對照孔(不加細(xì)胞，其他條件與前相同)和不同濃度(6.67，16.67，33.33，66.67μmol/L)姜黃素組，每組設(shè)12個(gè)復(fù)孔。將培養(yǎng)板移入CO2孵箱中，培養(yǎng)44h后，每孔加入5g/LMTT溶液10μl，37℃避光孵育4h，終止培養(yǎng)。吸去孔內(nèi)培養(yǎng)液，每孔加入100μlDMSO溶解振蕩15min，待結(jié)晶物充分溶解后(溶解呈藍(lán)紫色)，酶標(biāo)儀檢測各孔吸光值（A490nm）。癌細(xì)胞生長抑制率=（1-實(shí)驗(yàn)組A值/對照組A值）。1.2.2細(xì)胞周期檢測取對數(shù)期生長的H

5、EC1B，胰酶消化制成密度為5×106/L的細(xì)胞懸液，接種于15個(gè)培養(yǎng)瓶內(nèi)，每瓶4mL，37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，細(xì)胞完全展開貼壁。此時(shí)換液，分別設(shè)對照組和不同濃度的(6.67，16.67，33.33，66.67μmol/L)姜黃素組，每組3個(gè)樣本。繼續(xù)培養(yǎng)48h，終止培養(yǎng)。4℃預(yù)冷的PBS沖洗2次，用2.5g/l胰蛋白酶消化成懸液，離心8min，去上清，分別收集于15個(gè)EP管，每個(gè)EP管加碘化丙啶(PI)1mL，避光孵育15min，用流式細(xì)胞儀(FACS)分析細(xì)胞周期時(shí)相。1.2.3熒光染色凋亡細(xì)胞核形態(tài)觀察取對數(shù)期生長的HEC1B，胰酶消化制成密度為

6、5×106/L的細(xì)胞懸液，接種于24孔培養(yǎng)板，每孔1.5ml。24h后細(xì)胞完全貼壁展開，更換培養(yǎng)液，分別設(shè)對照孔和不同濃度的(6.67，16.67，33.33，66.67μmol/L)姜黃素組，每組4個(gè)復(fù)孔。繼續(xù)培養(yǎng)48h，終止培養(yǎng)。移去培養(yǎng)基，用冷的PBS洗3次，4%的多聚甲醛固定30min，棄固定液，PBS沖洗3次，加5mg/LHoechst33258閉光染色15min,棄掉，PBS沖洗后熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞核形態(tài)，以核碎裂、核固縮、染色體斷裂、凋亡小體形成和熒光強(qiáng)度增強(qiáng)等作為凋亡細(xì)胞指征。每張片隨機(jī)選取4個(gè)高倍視野，計(jì)算凋亡細(xì)胞占每個(gè)視野總細(xì)胞數(shù)的百分

7、比，求出4個(gè)視野平均百分比，作為該樣本的凋亡百分比，每組取3張蓋玻片。1.2.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以(±s)表示，應(yīng)用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件對資料進(jìn)行單因素方差分析。P0.05表示差異有顯著性意義，P0.01表示差異有非常顯著性意義。2結(jié)果2.1姜黃素對子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖的影響與未加藥的對照組相比，給藥各組癌細(xì)胞的A490nm值明顯降低，差異有非常顯著性意義(P0.01)，且在一定濃度范圍內(nèi)呈劑量依賴性，表明姜黃素對HEC1B增殖有抑制作用，見表1。表1姜黃素對子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖的影響注：*P0.01,與對照組比較.ΔP0.01,與姜黃素Ⅰ,#P0.01

8、,與姜黃素Ⅱ。2.2姜黃素對子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞周期時(shí)相的