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《圣經(jīng)輔導(dǎo)碩士科阮懿娜》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、http://www.paper.edu.cn豬瘟病毒E2基因重組腺病毒的構(gòu)建及特性研究馬友記(甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，甘肅蘭州730070)摘要：研究采用RT-PCR技術(shù)對豬瘟病毒（CSFV）E2基因進行了克隆、測序和特征分析，得到長度為1101bp，編碼367個氨基酸殘基的目的基因片段。將克隆到的E2基因插入到pAdTrack-CMV穿梭質(zhì)粒中，再將重組穿梭質(zhì)粒pAdTrack-CMV/E2用PmeⅠ線性化后電轉(zhuǎn)化攜帶有腺病毒骨架載體pAdeasy-1的大腸桿菌BJ5183感受態(tài)細胞，經(jīng)細菌內(nèi)同源重組產(chǎn)生重組腺
2、病毒質(zhì)粒pAdEasy-E2，經(jīng)酶切充分暴露反向末端重復(fù)序列，再與脂質(zhì)體混合轉(zhuǎn)染AD-293細胞，成功獲得了AD-E2復(fù)制缺陷型腺病毒，經(jīng)檢測證實AD-E2穩(wěn)定性好，安全性高。轉(zhuǎn)錄水平檢測證實，E2蛋白基因得到了轉(zhuǎn)錄；熒光檢測發(fā)現(xiàn)，外源蛋白已得到表達。關(guān)鍵詞：豬瘟病毒；E2基因；腺病毒；表達ConstructionandcharacterizationofrecombinantadenoviruswithE2geneofclassicalswinefevervirusMaYouji(Facultyofanimalsc
3、ienceandtechnology,Gansuagriculturaluniversity,Lanzhou730070,China)Abstract：Inthisstudy，fulllengthE2geneofclassicalswinefevervirus(CSFV)wasclonedbyRT-PCR.TheresultsshowedthattheE2genecontains1101nucleotide，coding367aminoacides.Andthensubclonedintoadenovirusshut
4、tlevectorspAdTrack-CMV,andthetransfervectorpAdTrack-CMV/E2wasconstructed.Afterbeinglinearized,thepAdTrack-CMV/E2wastransformedintotheE.colistrainBJ5183cellsandtherecombinantsupercoiledadenoviralvectorpAdEasy-1wasconstructedinthecells,Aftertheinvertedterminalrep
5、eat(ITR)sequenceofpAdEay-1wasexposedfullybyrestrictionenzymedigestion，theresultantrecombinantwastransfectedintoAD-293withlipoplast.ThecurrentresultsshowedthatastableandsafetyreplicationdefectiverecombinantadenovirusAD-E2wasproducedsuccessfully.TheE2wastranscrib
6、edandexpressed，whichwasconfirmedbyafluorescencemicroscope.Keywords:classicalswinefevervirus；E2gene；adenovirus；express作者簡介:馬友記(1976-)，男，漢族，博士,副教授，研究方向動物生產(chǎn)系統(tǒng)與工程1http://www.paper.edu.cn豬瘟（Classicalswinefever，簡稱CSF）是危害我國養(yǎng)豬業(yè)最嚴(yán)重的傳染病之一，被國[1]際動物衛(wèi)生組織(OIE)列為A類動物傳染病，我國將其列
7、為一類傳染病。自20世紀(jì)50年代末推廣使用豬瘟兔化弱毒苗以來，有效地控制了CSF在我國的大面積暴發(fā)性流行。但近幾年，我國豬瘟的發(fā)生又呈上升趨勢，其流行特點也發(fā)生了重大變化，以溫和型豬瘟和母豬[2,3]持續(xù)感染引起的流產(chǎn)、死胎、新生仔豬死亡等給養(yǎng)豬業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟損失。豬瘟病毒(CSFV)屬于黃病毒科(Flaviviridae)瘟病毒屬(Pestivirus)，是具有囊膜的單股正鏈RNA病毒，約12.3kb，同屬的還有牛病毒性腹瀉病毒(Bovineviraldiarrhea-mucosaldisease[1]viru
8、s，簡稱BVDV)和羊邊界病病毒(BorderDiseaseVirus，簡稱BDV)，CSFV至少含有位于表面的糖蛋白E1、E2及非糖基化的核心蛋白C三種多肽，其中E2含有與病毒中和作用有關(guān)的主要抗原決定簇，編碼的是CSFV的E2囊膜糖蛋白，該蛋白參與病毒感染細胞的過程[4,5]及激活中和抗體產(chǎn)生。目前防治CSF的基因工程疫苗研究還處于實驗室研
