熒光分光光度計(jì)課件

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1、光學(xué)分析儀器（2）熒光分光度計(jì)的原理與應(yīng)用技術(shù)8/3/20211光學(xué)分析儀器培訓(xùn)熒光分光光度法光學(xué)分析儀器主要是通過(guò)電磁波與物質(zhì)互作用后，物質(zhì)對(duì)電磁輻射產(chǎn)生吸收或再發(fā)射，測(cè)量所得到的信息來(lái)對(duì)物質(zhì)加以研究的分析儀器。這方面的儀器很多,在這里我們主要對(duì)紫外—可見(jiàn)分光光度計(jì)和熒光分光光讀計(jì)加以討論。1、熒光分光光度法簡(jiǎn)介8/3/20212光學(xué)分析儀器培訓(xùn)熒光分光光度法光學(xué)分析儀器因?yàn)槲镔|(zhì)對(duì)光的選擇性吸收的特點(diǎn)，他的吸收有如下的特性M+h??M*M+熱基態(tài)激發(fā)態(tài)M+熒光或磷光1、熒光分光光度法簡(jiǎn)介8/3/20213光學(xué)分析儀器培

2、訓(xùn)熒光分光光度法原子發(fā)射光譜法：原子熒光分析發(fā)射光譜法分子發(fā)射光譜法：熒光分析、磷光分析光譜分析法原子吸收光譜法：原子吸收分光分析吸收光譜法分子吸收光譜發(fā)：紫外可見(jiàn)、紅外吸收光譜1、熒光分光光度法簡(jiǎn)介8/3/20214光學(xué)分析儀器培訓(xùn)熒光分光光度法熒光分光光度法當(dāng)用紫外光照射某種物質(zhì)時(shí)，這些物質(zhì)會(huì)發(fā)出各種顏色和不同強(qiáng)度的光，當(dāng)紫外光停止照射時(shí)，這種光線也隨之消失。我們這種光線稱為熒光。依據(jù)物質(zhì)所發(fā)熒光的顏色和強(qiáng)度建立起來(lái)的定性和定量的分析方法稱為熒光分光光度法。1、熒光分光光度法簡(jiǎn)介8/3/20215光學(xué)分析儀器培訓(xùn)熒光

3、分光光度法熒光的產(chǎn)生：熒光是一種自然現(xiàn)象，在我們的日常生活中到處可以看見(jiàn)。產(chǎn)生熒光的原因是：熒光物質(zhì)分子吸收了特征頻率的能量后，由基態(tài)躍遷到激發(fā)態(tài)，然后內(nèi)能轉(zhuǎn)換消耗部分能量，返回到最低電子激發(fā)態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)，再?gòu)倪@個(gè)能級(jí)返回基態(tài)時(shí)所發(fā)的光，這束光我們稱為熒光。熒光發(fā)射的能量要比吸收光的能量?。úㄩL(zhǎng)要長(zhǎng)）。在這里我們用分子能級(jí)圖就能夠很好的理解它的產(chǎn)生過(guò)程。1、熒光分光光度法簡(jiǎn)介8/3/20216光學(xué)分析儀器培訓(xùn)熒光分光光度法分子能級(jí)圖：1、熒光分光光度法簡(jiǎn)介8/3/20217光學(xué)分析儀器培訓(xùn)熒光分光光度法熒光分析儀器的

4、結(jié)構(gòu)和主要部件：2、熒光分光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu)光源激發(fā)單色器樣品室發(fā)射單色器檢測(cè)器顯示裝置8/3/20218光學(xué)分析儀器培訓(xùn)熒光分光光度法2、熒光分光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu)2.1、光源：對(duì)光源的要求是必須有足夠的強(qiáng)度且具有連續(xù)光譜，其波長(zhǎng)范圍能滿足儀器的需要。大部分儀器由氙燈組成它對(duì)能量的要求沒(méi)有紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)那么嚴(yán)格。8/3/20219光學(xué)分析儀器培訓(xùn)熒光分光光度法2、熒光分光光度法簡(jiǎn)介2.2、單色器：色器也是熒光分光度計(jì)的核心部件。它有兩個(gè)單色器激發(fā)單色器它的作用是將光源發(fā)出的白色光色散成各種波長(zhǎng)的單色光用于照射樣品，發(fā)

5、射單色器的作用只讓樣品發(fā)出的熒光通過(guò)。8/3/202110光學(xué)分析儀器培訓(xùn)熒光分光光度法2、熒光分光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu)2.3、樣品室樣品室比較寬大，以容納各種光徑的樣品池和附件。如流動(dòng)池，微量池等。樣品池全用石英材料制成，沒(méi)有玻璃樣品池。8/3/202111光學(xué)分析儀器培訓(xùn)熒光分光光度法2、熒光分光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu)2.4、檢測(cè)器熒光分光光度計(jì)常用的是光電檢測(cè)器。如光電池、光電管、光電倍增管和二極管陣列j檢測(cè)器?，F(xiàn)在大部分是光電管2.5、記錄和放大裝置：將測(cè)量到的熒光強(qiáng)度顯示出來(lái)。8/3/202112光學(xué)分析儀器培訓(xùn)熒光分光

6、光度法熒光分光光度計(jì)于紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)的區(qū)別2、熒光分光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu)8/3/202113光學(xué)分析儀器培訓(xùn)熒光分光光度法2、熒光分光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu)2.6、日立850熒光分光光度計(jì)光路圖：（8/3/202114光學(xué)分析儀器培訓(xùn)熒光分光光度法3、熒光分光光度法的特點(diǎn)3.1、特點(diǎn)有以下幾點(diǎn)：（1）靈敏度高熒光分析的最大特點(diǎn)是靈敏度高，通常比紫外可見(jiàn)光度計(jì)高出2—3個(gè)數(shù)量級(jí)。（2）選擇性強(qiáng)熒光光譜包括激發(fā)光譜和發(fā)射光譜。因此確定恰當(dāng)?shù)募ぐl(fā)光譜和發(fā)射波長(zhǎng)，能達(dá)到很高的選擇。8/3/202115光學(xué)分析儀器培訓(xùn)熒光分光光度

7、法3、熒光分光光度法的特點(diǎn)（3）試樣量少和方法簡(jiǎn)單由于熒光分析法靈敏度高，因而分析時(shí)需試樣量較小。特別在使用微量池時(shí)，用樣量可以大大減小。（4）能獲得更多的信息熒光分析可提供激發(fā)光譜、發(fā)射光譜、熒光強(qiáng)度、總熒光量、峰位、譜帶寬度、量子產(chǎn)率、熒光壽命等參數(shù)。8/3/202116光學(xué)分析儀器培訓(xùn)熒光分光光度法3、熒光分光光度法的特點(diǎn)（5）受外界影響較大外界因素如溫度、PH值、溶劑和其它因素都可能顯著地影響分析結(jié)果。其中溫度對(duì)他的影響最大，這也是熒光分析需標(biāo)準(zhǔn)的原因。8/3/202117光學(xué)分析儀器培訓(xùn)熒光分光光度法3、熒光分

8、光光度法的特點(diǎn)3.2、熒光分光光度法的發(fā)展近年來(lái)，熒光分光度計(jì)隨著新技術(shù)的的采用，發(fā)展非?？?，特別是計(jì)算機(jī)和其它先進(jìn)技術(shù)應(yīng)用的引入，是熒光光度計(jì)發(fā)生了根本的變化，相應(yīng)的分析方法也得到很快的發(fā)展，象激光熒光分析技術(shù)、時(shí)間分辨熒光分光光度法、同步熒光分析法，這些又大的推動(dòng)了分析方法在理論和應(yīng)用方面的進(jìn)展。同時(shí)促進(jìn)熒光分析